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• ¿es posible aplicar la QbD fuera del ámbito del análisis de
medicamentos?
• ¿Qué aporta un desarrollo analítico siguiendo QbD frente
a la metodología tradicional?
La respuesta a la primera pregunta es obvia ya que no
existe ningún impedimento regulatorio para la aplicación de QbD,
siempre que se trate del desarrollo de un método analítico físico o
físico-químico.
Por otra parte, en nuestra experiencia, podemos afirmar
que el ámbito real de aplicación de la QbD para métodos analíticos
puede abarcar no sólo el análisis cuantitativo de medicamentos, sino
también otros métodos analíticos en los que se determinan otras
propiedades. tal es el caso de la citoferometría, modalidad de elec-
troforesis de células y partículas en suspensión, con la que es posible tiempo (inversamente proporcionales a los valores de movilidad
determinar la movilidad electroforética de eritrocitos normales y pa-
tológicos, entre otras muestras.
esta afirmación está basada en una serie de trabajos de
validación de un programa informático desarrollado “ad hoc” en
la fase PQ (Process Qualification o cualificación de Proceso) según
la Guía GAmP 5 (26). en estos trabajos se reprocesaron datos del
desarrollo original de un método citoferométrico realizado a partir
del año 1986 como parte de mi tesis doctoral, de acuerdo con los
principios QbD actuales de manera que fuera posible verificar el co-
rrecto funcionamiento del programa informático.
Los datos analíticos originales se obtuvieron con un cito-
ferómetro Zeiss, equipo instrumental que se muestra en la figura 6
y que consta de las siguientes partes:
• un microscopio de eje óptico horizontal, uno de cuyos
oculares presenta una lente reticulada que permite
medir el tiempo que tardan los eritrocitos en recorrer
una determinada distancia.
• una cámara de electroforesis de 1,4 cm de longitud
y 7,6 x 10-2 cm de profundidad introducida en una
cámara termostatizada que permite variar la tem-
peratura de trabajo.
• una fuente de alimentación capaz de generar una
diferencia de potencial entre 0 y 900 V.
• Dos electrodos de platino.
• un conmutador que permite la inversión del campo
eléctrico generado.
Para realizar las medidas de movilidad electroforética se
aplicó un potencial determinado y se midió con un cronómetro de
precisión el tiempo que tardan los eritrocitos en recorrer 0,0032 cm
(dos intervalos de retículo) en las dos direcciones del campo eléctrico
aplicado, cuando se encuentran en una solución salina isotónica
cuya resistencia específica se conoce previamente.
Application of quality by design (QbD) approach to the development of a cytopherometric analy-
246 tical method of human red blood cells: comparison with traditional development methodology
Fernando Ferrándiz Vindel
An. Real Acad. Farm. Vol. 86. Nº4 (2020) · pp. 237 - 256
ANALES
RANF
www.analesranf.com
Puesto que la movilidad electroforética µ se define me-
diante la expresión matemática,
siendo: l = distancia recorrida (cm)
t = tiempo empleado (s)
i = intensidad de corriente aplicada (A)
r = resistencia específica del medio de suspensión (O x cm)
h = longitud de la cámara de electroforesis (cm)
t = profundidad de la cámara de electroforesis (cm)
es evidente que se puede trabajar directamente con las medidas de
electroforética) para seguir la metodología QbD de una manera rá-
pida y eficaz.
Adicionalmente, los nuevos resultados se compararon con
los obtenidos mediante la metodología tradicional de manera que
se pudo responder a la segunda pregunta planteada al comienzo
de este apartado.
como punto de partida, y según el desarrollo del método
citoferométrico original (27), la metodología más conveniente con-
siste en la aplicación de un campo eléctrico de 10 mA a eritrocitos
recién lavados (conservados a 4 ºc si es necesario), suspendidos en
solución salina fisiológica (pH = 5,65, fuerza iónica resistencia =
0.1 m) y medidos dentro de una cámara termostatizada a 25-30 ºc,
con el fin de obtener resultados analíticos con una precisión y una
selectividad adecuadas.
Por su parte, para el desarrollo y validación del método
analítico según la QbD se siguieron los siguientes pasos secuenciales
(steps) descritos en las guías internas del laboratorio donde des-
arrollo mi actividad profesional:
• step 1: desarrollo del método (method development), en
el que habitualmente se diseña el método, se establece
el AtP, los cPm y los cmA basados en la guía IcH Q2(r1)
(2), así como los correspondientes criterios de aceptación
que deben ser comprobados experimentalmente.
• step 2: evaluación del riesgo (risk assessment), en el que
se determinan todos los factores que potencialmente pue-
den tener un impacto en el comportamiento del método
analítico, y se establece su nivel de prioridad y su posible
efecto sobre la robustez (factores X) y la reproducibilidad
(factores n).
• step 3: robustez del método (method robustness), en el
que se emplea el Diseño de experimentos para definir el
espacio de Diseño que es la zona en la que los factores X
permiten el cumplimiento de los criterios de aceptación