Page 46 - 86_01
P. 46
ANALES
RANF
www.analesranf.com
cia de replicación con la deleción de genes inmunomoduladores dío-temprano optimizado al que denominamos promotor LEO (“Late
(B19R), confieren al vector una serie de características biológicas in Early Optimized”) que, con respecto al promotor sintético tradicional,
vitro entre las que podemos destacar: mayores niveles de expresión compartía el núcleo de la parte tardía, pero intercambiado de posición,
del antígeno heterólogo, competencia de replicación en queratinocitos seguido de la nueva secuencia consenso temprana definida y de un es-
humanos y fibroblastos dérmicos, inducción de la expresión de IFN-y paciador de 38 nucleótidos. El nuevo promotor se incorporó en un plás-
genes inducidos por IFN y activación de genes implicados en el proce- mido de transferencia controlando la transcripción del gen reportero
samiento y presentación de antígenos. Esto correlaciona con una me- GFP (proteína verde fluorescente) y su fortaleza se estudió en el con-
jora significativa en la presentación cruzada del antígeno por parte de texto del recombinante basado en MVA generado (MVA-LEO-GFP). En
las células diana infectadas a las células T CD8 específicas del VIH, así comparación con el promotor tradicional, LEO mejoró significativa-
como una mayor proliferación de los clones de memoria. Además, estos mente los niveles de expresión de GFP en la primera hora después de
vectores poseen una propagación limitada en tejidos y mantienen un la infección, lo que se correlacionó con una mejora en la respuesta in-
fenotipo altamente atenuado in vivo (40, 41). mune de células T CD8+ GFP-específicas (44). Un alargamiento de
la región espaciadora de 38 a 160 nucleótidos (LEO160) mejoró la ex-
2.6.c. Uso de moléculas coestimuladoras presión temprana y la respuesta de células T CD8+ y CD4+ especí-
El objetivo de esta estrategia consiste en mejorar la inmu- ficas de memoria frente al antígeno LACK de Leishmania (45).
nogenicidad de los vectores atenuados mediante el suministro simul- 2.6.e. Optimización del inserto
táneo de una molécula estimuladora junto con el antígeno heterólogo. Además de las modificaciones del vector que acabamos de
En nuestro caso, esta aproximación fue abordada mediante describir, otro enfoque que hemos explorado con el objetivo de mejorar
la utilización de la forma hexamérica soluble de CD40L (sCD40L). la inmunogenicidad de los recombinantes basados en poxvirus ha sido
Nuestro estudio reveló que la administración de sCD40L era necesaria la optimización del antígeno heterólogo. Una de las estrategias que
tanto en el “prime” junto con el vector de ADN como en el “boost” hemos ensayado para superar el desafío que supone la diversidad glo-
junto con MVA-B o NYVAC-B para lograr un aumento en la magnitud bal del VIH-1 ha sido la utilización de secuencias consenso o mosaicos
y amplitud de la respuesta de células T específicas frente a los antígenos de la envuelta (Env) en lugar de secuencias derivadas de un determi-
del VIH-1. La administración de sCD40L un día después de cada in- nado aislado viral. Los mosaicos son pequeños conjuntos de antígenos
munógeno también resultó efectiva, pero no representó una mejora vacunales diseñados computacionalmente, utilizando un algoritmo ge-
en comparación con la administración conjunta. Este trabajo puso de nético, para aumentar la presentación de los epítopos potenciales de
manifiesto el beneficio inmunoestimulador de la molécula sCD40L células T (PTE) presentes en las proteínas naturales. Una vacuna de
(42). mosaico es un "cóctel" que contiene varias secuencias complementarias
que combinadas proporcionan una cobertura casi óptima de los PTE
2.6.d. Mejora de la fortaleza del promotor viral que circulan en una determinada población diana.
Todos los virus recombinantes descritos en este trabajo con-
Cuando estos antígenos se ensayaron de forma comparativa
tienen los genes heterólogos insertados bajo el control transcripcional en primates no humanos utilizando el protocolo heterólogo
de un promotor viral sintético temprano-tardío que garantiza su ex- ADN/Pox/proteína se observó que tanto los inmunógenos de consenso
presión durante ambas fases de la transcripción. Sin embargo, es po- como los mosaicos indujeron respuestas celulares y humorales especí-
sible mejorar el promotor viral mediante el intercambio de los ficas y cross-reactivas significativamente mayores que las potenciadas
elementos centrales para lograr maximizar la expresión del antígeno por el inmunógeno clásico derivado de un aislado viral (46).
recombinante a tiempos muy tempranos después de la infección. En
este sentido, se ha descrito que la eficiencia con la que se procesa y También ensayamos nuevos formatos de antígenos Env y
presenta un antígeno en la superficie de las células infectadas influye GPN optimizados que diferían de los que expresan los vectores recom-
en su reconocimiento y en la potenciación de la respuesta inmune es- binantes MVA y NYVAC de los subtipos B y C, en los que la proteína
pecífica generada (43). Env gp120 se secreta en forma monomérica y GPN se produce como
una poliproteína de fusión intracelular. Los nuevos recombinantes ge-
A partir de las secuencias promotoras (200 nt aguas arriba nerados expresaban la proteína Env gp140 que se secretaba en una
del codón de inicio) de 37 genes clasificados como genes inmediatos- conformación trimérica más parecida a la conformación nativa que
tempranos mediante el análisis transcriptómico de VACV, se realizó un adopta en el virus (NYVAC-gp140) o la proteína GPN que fue optimi-
análisis bioinformático que definió el elemento central o secuencia con- zada para sufrir procesamiento proteolítico y liberar partículas como
senso temprana que compartían estos genes, así como la distancia exis- virus (VLP) inducidas por Gag (NYVAC-Gag-Pol-Nef). Ambos vectores
tente entre este núcleo de secuencia y el codón de iniciación. Una vez estimulan respuestas innatas específicas en células humanas superiores
definidos ambos elementos, se diseñó un nuevo promotor sintético tar-
MVA-B como candidato vacunal frente al VIH/SIDA: de la inves-
44 tigación básica a los ensayos clínicos profiláctico y terapéutico.
Carmen Elena Gómez Rodríguez
An Real Acad Farm Vol. 86. Nº 1 (2020) · pp. 29 -60
