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ANALES
de Investigaciones Científicas (CSIC), y que fue transferida a la com-
pañía farmacéutica Laboratorios Esteve S.A.
2.6. Optimización de vectores recombinantes basados en
MVA y NYVAC
La capacidad restringida de replicación de las cepas atenua-
das MVA y NYVAC en diferentes líneas celulares de mamífero y en cé-
lulas humanas sin duda confiere a estos vectores un perfil de seguridad
óptimo para su utilización en clínica, pero también representa una li-
mitación si consideramos que la cantidad de antígeno que se expresa
está limitada al tiempo que permanece el virus en el organismo (48-
72 h). Sin embargo, a pesar de esta limitación, ambos vectores han
demostrado ser inmunogénicos en los diferentes modelos animales en-
sayados, debido, en gran medida, a la respuesta inflamatoria que in-
ducen en las células infectadas y que, a su vez, está correlacionada con
las deleciones en genes inmunomoduladores que han sufrido ambos
genomas virales durante su generación.
Como parte de un consorcio internacional financiado por la
Fundación Bill & Melinda Gates con el fin de desarrollar una vacuna
contra el VIH/SIDA basado en la optimización de los vectores de pox-
virus MVA y NYVAC, nuestro grupo se dedicó a explorar nuevas estra-
tegias que permitieran mejorar el perfil inmunogénico de ambas cepas.
Para lograr este propósito nos plantemos abordar diferentes aproxi-
maciones que incluían: (i) eliminar genes inmunomoduladores virales
todavía presentes en el genoma viral; (ii) mejorar la capacidad repli-
cativa del vector; (iii) utilizar moléculas coestimuladoras; (iv) mejorar ñalización de los TLRs interfiriendo con la interacción TLR-molécula
la fortaleza del promotor viral; y (v) optimizar los insertos. Las dife-
rentes estrategias se ensayaron sobre los recombinantes de MVA y
NYVAC que expresan los antígenos del VIH-1 de los subtipos B y C, ad-
ministrados utilizando el protocolo heterólogo ADN/Pox.
2.6.a. Deleción selectiva de genes inmunomoduladores
Como mencionamos con anterioridad, las cepas atenuadas
MVA y NYVAC exhibían comportamientos distintos tanto in vitro como
in vivo debido a las diferencias que existen en sus genomas como re-
sultado del proceso de generación al que fueron sometidas. La infección
con la cepa MVA induce un perfil inflamatorio mucho más agudo que
NYVAC, lo que garantiza el reclutamiento de mediadores inmunoló-
gicos que son capaces de activar una respuesta innata efectiva que cla-
rifica de forma eficiente el virus poco después de su entrada en el
organismo. Esta activación se produce debido a la cantidad de genes
inmunomoduladores que aparecen delecionados o mutados en su ge-
noma, que son mayores que los que se encuentran delecionados en la
cepa NYVAC, y que actúan en rutas de señalización claves en la evasión
de la respuesta antiviral. Sin embargo, ambos virus conservan intactos
muchos otros genes con funciones similares. Con estos antecedentes,
decidimos llevar a cabo deleciones selectivas de genes que estuvieran
implicados en una misma ruta de señalización, o incluso en rutas di-
42 tigación básica a los ensayos clínicos profiláctico y terapéutico.
RANF
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ferentes. El hecho de que NYVAC conserve un número mayor de genes
relacionados con la evasión de la respuesta antiviral nos permitía un
margen más amplio de experimentación para evaluar el efecto sobre
la respuesta inmune específica de una deleción individual o de múlti-
ples combinaciones.
De forma general, la estrategia de deleción selectiva de
genes inmunomoduladores produjo un aumento de la inmunogenici-
dad inducida por los vectores generados. Por ejemplo, la deleción de
los genes B19R y/o B8R que codifican receptores solubles de IFN tipo
I y tipo II, respectivamente, mejoró la magnitud y la calidad de la res-
puesta de células T CD8 específicas frente al VIH-1 durante las fases
adaptativa y de memoria en el modelo murino (28). Asimismo, el aná-
lisis transcriptómico realizado en monocitos humanos infectados con
estos mutantes demostró que ambas deleciones activan la expresión
de los factores IRF3, IRF7 y STAT1 y estimulan la producción de altos
niveles de IFN tipo I y de genes estimulados por IFNs (ISGs); sin em-
bargo, solo la doble deleción B8R/B19R logró inducir la máxima res-
puesta inflamatoria (29). La combinación de deleciones en genes
relacionados con la ruta de señalización del IFN (B19R, B8R) junto con
regiones genómicas (B6R-B10R) que incluyen genes que codifican el
receptor soluble de TNF-a (B7) o proteínas con funciones desconocidas
(B6, B9 y B10) no logró mejorar la inmunogenicidad inducida por el
doble mutante de deleción ?B19R/B8R (30). Un efecto similar se ob-
servó cuando delecionamos genes que bloquean la ruta de activación
del factor de transcripción NF?B a diferentes niveles. La deleción in-
dividual del gen A46R, que actúa a un nivel superior en la ruta de se-
adaptadora, aumenta la secreción de las citoquinas TNF, IL-6 e IL-8 en
macrófagos humanos in vitro y mejora la magnitud de la respuesta
inmune de las células T CD4 y CD8 específicas del VIH-1 in vivo (31);
sin embargo, cuando realizamos deleciones secuenciales sobre este
mutante de otros genes virales siguiendo el nivel en el que actúan blo-
queando la ruta de activación de NF?B (A52R-K7R-B15), observamos
que solo la doble deleción ?A46R/A52R logró inducir un beneficio in-
munológico con respecto al mutante simple (30). Curiosamente, cuando
abordamos la estrategia de deleción de esta ruta manteniendo intacto
el gen A46R pero delecionando A52R-K7R-B15R, descubrimos que solo
la deleción triple era capaz de restaurar la función de NF?B en ma-
crófagos. De este modo, la infección con NYVAC-C ?3 activa la vía de
señalización de NF?B produciendo un aumento en la expresión de ci-
toquinas/quimioquinas (IL-6, MCP-1, MIP-1ß, KC) que incrementa la
migración de neutrófilos (Na y Nß) al sitio de inoculación y su acti-
vación. Una vez activados, la infección con NYVAC-C ?3 promueve una
mayor migración de neutrófilos, preferentemente de los neutrófilos
Nß, a los órganos linfoides secundarios. Estos neutrófilos Nß sobre-
expresan en su superficie marcadores específicos de células presenta-
doras de antígeno que les permiten activar a las células T CD8
específicas de forma directa (Figura 10).
MVA-B como candidato vacunal frente al VIH/SIDA: de la inves-
Carmen Elena Gómez Rodríguez
An Real Acad Farm Vol. 86. Nº 1 (2020) · pp. 29 -60