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Ana García Aguilar, Carlos Guillén Viejo, Manuel Benito de las Heras

Figura 7.?Efectos de la NAM y el RESV sobre el estado de acetilación en lisinas de TSC2, la ruta mTORC1, y la autofagia. Un día
después de la transfección con las proteínas recombinantes HA-TSC2 y Flag-SIRT1 (A), o SIRT1-NLS2-GFP (B), o SIRT1-NES2-GFP
(C), las células se cambiaron de medio y fueron sometidas a tratamientos con NAM y RESV durante 2 h. * Banda inespecífica.?

Para confirmar el papel de SIRT1 en el control del actividad de mTORC1 estaba significativamente
estado de acetilación de TSC2, usamos células MEF Sirt1 aumentada en las células MEF Sirt1 -/-. Por el contrario,
+/+ y Sirt1 -/-. En los MEF Sirt1 +/+ la NAM estimuló la los efectos de NAM y RESV sobre la acetilación de TSC2
vía de mTORC1 y aumentó la acetilación de TSC2, y la vía de mTORC1 se vieron abolidos en los MEF Sirt1 -
mientras que el RESV disminuyó la actividad de mTORC1 /-, así como tras la estimulación con el inhibidor químico
y mantuvo el estado de acetilación de TSC2. Por otro lado, de la actividad desacetilasa de SIRT1, el Ex-527 en las
se observó que el estado de acetilación de TSC2 y la células MIN6 (Figura 8).

Figura 8.?La modulación del estado de acetilación de TSC2 y la actividad de la ruta mTORC1 en respuesta a NAM y a RESV es
dependiente de SIRT1. (A) Las células MEF Sirt1 +/+ y Sirt1 -/- fueron estimuladas con NAM y RESV durante 2 h. (B) Las células
MIN6 sin y con un pretratamiento de 30 minutos del Ex-527 (100 nM), y a continuación estimuladas con NAM y RESV durante 2 h.
Histogramas que representan el ratio P-p70 (T389)/p70total expresados como la media de tres experimentos diferentes ± SD. *P<0.05; **
P<0.01, *** P<0.001; n.s. sin diferencia significativa. ?

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