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Tuberin protein: therapeutic target to activate autophagy and mitophagy avoiding the progression to type 2 diabetes

Figura 11.?La acetilación de TSC2 está correlacionada con una mayor ubiquitinación y degradación de la proteína. (A) Las células
HEK 293T fueron sometidas a un tratamiento con NAM o RESV (2h), seguido de una IP de TSC2 y análisis por WB de FK2 y Ac-Lys.

Todos los blots son representativos de al menos tres experimentos diferentes, y los correspondientes ratios (FK2/TSC2 y Ac-Lys-TSC2)

están representados en los histogramas de barras expresados con la media ± S.D. *P<0.05; *** P<0.001. (B) Las células HEK 293T
fueron estimuladas con cicloheximida (CHX, 100 µg/ml) durante 30 minutos, y después, tratadas con NAM o RESV (4h). ** P<0.01. n.s.

sin diferencia significativa.

3.3. Papel de TSC2 sobre la activación de la mitofagia en actividad de la ruta mTORC1 y un aumento en la
respuesta a un daño oxidativo activación de la macroautofagia. Asimismo, estas células
eran capaces de acumular PINK1 en respuesta a CCCP.
A continuación, nos propusimos profundizar en el Sin embargo, las células MEF TSC2-/- además de
papel de la ruta TSC2/mTORC1 específicamente en la presentar un mantenimiento en la actividad de mTORC1 y
activación del proceso de mitofagia. Como ya sabemos, las un impedimento en la activación de la macroautofagia tras
mitocondrias desacopladas son rápidamente marcadas por un tratamiento con CCCP, también presentaban una
proteínas de la maquinaria autofágica y degradadas en los incapacidad en la acumulación de la proteína PINK1 tras
autolisosomas. Otro trabajo, esta vez de nuestro grupo estimulaciones a diferentes tiempos con CCCP.
(22), evidenció que este modelo (ßTSC2-/-) presentaba una Curiosamente, el tratamiento con rapamicina en estas
menor degradación mediada por autofagia de las células TSC2-/- no fue capaz de revertir la acumulación de
mitocondrias (mitofagia) en la célula ß. Todos estos datos PINK1 en la membrana mitocondrial, pero si
in vivo sugerían que el modelo animal ßTSC2-/- encontrábamos activación de la macroautofagia (aumento
presentaba un flujo autofágico y mitofágico alterado. Por de la lipidación de LC3B). Estos resultados sugieren que
lo que nos propusimos profundizar en la causa de por qué TSC2 presenta un papel regulador positivo de la expresión
estaban fallando estos procesos, mediante su análisis in génica de Pink1, y que las células deficientes de TSC2
vitro. Para lograr este objetivo, usamos el agente inductor muestran un defecto cuantitativo en la acumulación de
de mitofagia (CCCP) en los MEF TSC2+/+ y TSC2-/-. PINK1 (Figura 12).

En las células MEF TSC2+/+ en respuesta a CCCP,
observamos una respuesta esperada de disminución en la

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