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Tuberin protein: therapeutic target to activate autophagy and mitophagy avoiding the progression to type 2 diabetes

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Figura 6. Modulación del estado de acetilación en lisinas de TSC2 y la regulación de la ruta mTORC1 en respuesta a NAM y a
RESV. (A) Inmunoprecipitación (IP) de las lisinas acetiladas (Ac-Lys) endógenas procedentes de células HEK 293T estimuladas o no
con NAM y RESV durante 2 y 4 h, y WB con el anticuerpo de anti-TSC2. Asimismo, se realizaron WB frente a las proteínas P-p70
(T389), TSC2 y ß-actina. (B) Cuantificación del ratio de lisinas acetiladas de TSC2 en respuesta a NAM o RESV, representados como la
media ± la desviación estándar (SD). *** P<0.001; n.s. sin diferencia significativa. (C) IP del TSC2 endógeno de células HEK 293T en
respuesta a NAM y RESV (2h), y WB frente a SIRT1 y TSC2 para ver su asociación física.??

Se ha descrito que SIRT1 es una proteína que se localización exclusivamente nuclear).
encuentra fundamentalmente en el núcleo, aunque presenta
un transporte núcleo-citoplasma, gracias al cual puede El análisis reveló que la NAM estimuló la vía de
localizarse también en el citoplasma en respuesta a mTORC1, no potenció la respuesta autofágica, e
diferentes estímulos. En su estructura se localizan incrementó la acetilación en las lisinas de TSC2 en todos
secuencias de localización nuclear (NLS) y de exclusión los casos. Por otro lado, el resveratrol, inhibió la vía de
nuclear (NES) (11). Sin embargo, TSC2 es una proteína mTORC1, y evitó (en los casos de SIRT1-WT y SIRT1-
fundamentalmente citoplasmática. Para corroborar estos NES2) o disminuyó (SIRT1-NLS2) la acetilación de
datos obtenidos con proteínas endógenas, hicimos TSC2. Asimismo, RESV indujo la respuesta autofágica en
experimentos de co-transfección de manera transitoria con todos los casos, aunque en menor medida en el caso en el
las proteínas recombinantes HA-TSC2, Flag-SIRT1-WT, que SIRT1 se localizaba predominantemente en el núcleo.
SIRT1-WT-GFP, SIRT1-NL2-GFP (de localización Aquí, como control de que el resveratrol había funcionado
exclusivamente citoplasmática) y SIRT1-NES-GFP (de se realizó una inmunoprecipitación de las lisinas acetiladas
y WB frente a PGC1a (diana de SIRT1) (Figura 7).

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