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Regulación
de
la
neurotransmisión
glicinérgica…

3.
2.
La
presencia
de
PGE2
reduce
la
ubiquitinación
de
GlyT2

En
el
caso
de
GlyT2
y
otros
transportadores
de
neurotransmisores,
la

ubiquitinación
se
ha
demostrado
como
una
herramienta
eficiente
que
posee
la

célula
para
mantener
un
control
fino
del
número
de
moléculas
presentes
en
la

membrana
plasmática,
de
tal
modo
que
la
imposibilidad
de
adición
de
moléculas

de
ubiquitina
a
los
transportadores
se
traduce
en
un
aumento
del
número
de

moléculas
activas
en
la
superficie
celular,
ya
que
su
endocitosis
se
encuentra

bloqueada
(7,
8,
32,
33).
Por
tanto,
quisimos
determinar
si
el
aumento
de
actividad

de
GlyT2
por
PGE2
podría
estar
relacionado
con
variaciones
en
el
estado
de

ubiquitinación
del
transportador.
Para
ello
realizamos
incubaciones
de

sinaptosomas
durante
una
hora
en
presencia
o
ausencia
de
10µM
PGE2,
y

cuantificamos
la
cantidad
de
GlyT2
ubiquitinado.
Esto
se
realiza
mediante
el
uso
de

un
anticuerpo
anti-­-multi
ubiquitina
unido
a
agarosa
(clon
FK2),
que
reconoce

proteínas
mono
y
poliubiquitinadas,
pero
no
ubiquitina
libre
(34).
De
este
modo,

desde
un
lisado
de
sinaptosomas
previamente
tratados
con
PGE2
o
vehículo
se

pueden
inmunoprecipitar
y
aislar
todas
las
proteínas
ubiquitinadas
y,
mediante

Western
blot,
podemos
cuantificar
únicamente
las
variaciones
que
se
han

producido
sobre
GlyT2
y
establecer
diferencias.

Como
se
observa
en
la
Figura
4,
mientras
que
la
cantidad
de
proteína
total

correspondiente
a
GlyT2
no
se
ve
afectada
por
la
presencia
de
PGE2,
la
proporción

de
transportador
ubiquitinado
disminuye
significativamente
hasta
un
68,74
±

5,6%.
Estos
resultados
sugerirían
que
la
activación
del
transporte
específico
de

GlyT2
en
presencia
de
PGE2,
presumiblemente
a
través
de
los
receptores
EP3,

puede
deberse
a
la
disminución
de
la
ubiquitinación
del
transportador.
Esto

favorecería
la
proporción
de
GlyT2
desubiquitinado
incapaz
de
endocitar
al

interior
celular,
aumentando
por
tanto
el
número
de
moléculas
activas
en
la

superficie
celular.
Así,
se
produciría
un
aumento
global
de
la
recaptación
de
glicina

en
la
sinapsis
y
por
tanto
una
menor
neurotransmisión
por
falta
de

neurotransmisor
en
el
espacio
sináptico,
lo
que
contribuye
y
refuerza,
desde
la

presinapsis,
a
la
inhibición
de
la
neurotransmisión
glicinérgica
debida
a
la

disminución
de
la
actividad
del
receptor
postsináptico
(18).

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