Page 56 - 79_03

Regulación
de
la
neurotransmisión
glicinérgica…

técnica
de
Western
blot
y
detección
con
anticuerpos
específicos
de
cada
subtipo
de

receptor
pudimos
observar
y
cuantificar
la
expresión
de
cada
uno,
detectando
una

mayor
expresión
de
los
receptores
EP1
y
EP3,
y
una
menor
expresión
de
los

receptores
EP2
y
EP4
(Figura
2A-­-B),
lo
que
sugeriría
una
mayor
implicación
de

EP1
y
EP3
en
la
activación
de
GlyT2.
Aunque
algunos
efectos
inducidos
por
PGE2

en
distintos
tejidos
son
mediados
por
la
contribución
de
varios
subtipos
de

receptores
EP
a
la
vez
(26,
27),
lo
más
común
es
que
únicamente
la
transducción
a

través
de
un
solo
subtipo
resulte
determinante
para
el
efecto
concreto
(19,
28-­-31).

De
este
modo,
para
determinar
la
implicación
de
cada
posible
vía
de
transducción

utilizamos
agonistas
específicos
de
cada
uno
de
los
receptores,
intentando

determinar
la
contribución
aislada
de
cada
subtipo
de
receptor
sobre
la
activación

de
GlyT2
mediada
por
PGE2.
Los
agonistas
utilizados
fueron:
sulprostona,

beraprost,
butaprost
y
TCS250.
La
sulprostona
activa
los
receptores
EP1
y
EP3
con

unas
constantes
de
afinidad
de
21
nM
y
0,6
nM
(25),
de
manera
que
puede
ser

utilizada
para
determinar
el
efecto
de
ambos
receptores
a
la
vez.
beraprost
es
un

agonista
para
EP2,
Butaprost
activa
selectivamente
a
EP3
y
TCS250
es
un

compuesto
relativamente
reciente
que
activa
específicamente
a
EP4.

Figura
2.-­-
Los
receptores
EP3
y
EP1
se
expresan
en
mayor
medida
que
los
receptores
EP2
y

EP4
en
sinaptosomas
de
médula
espinal
de
rata.
A-­-B)
20
µg/carril
de
lisados
de
sinaptosomas

de
médula
espinal
de
rata
fueron
cargados
en
gel
SDS-­-PAGE.
Cada
receptor
se
reveló
con
su

anticuerpo
específico,
y
se
reincubó
anti-­-calnexina
(CNX)
como
control
de
carga.
B)
La

densitometría
de
cada
receptor
fue
normalizada
respecto
a
la
detección
de
CNX,
y
se
representa
con

unidades
arbitrarias.

441