Page 55 - 79_03

J.
de
Juan-­-Sanz
&
col.

de
médula
espinal
de
rata
en
presencia
o
ausencia
de
10
µM
PGE2
durante

diferentes
tiempos.
Estas
medidas
se
realizan
midiendo
la
cantidad
de
glicina

tritiada
incorporada
en
los
sinaptosomas
por
unidad
de
tiempo,
y
se
realizan
en

presencia
de
NFPS
(un
inhibidor
específico
de
GlyT1)
para
cuantificar
el
transporte

de
glicina
radiactiva
únicamente
debido
a
la
actividad
de
GlyT2.
Como
se
observa

en
la
Figura
1,
fuimos
capaces
de
determinar
que
efectivamente
PGE2
produce

variaciones
sobre
la
recaptación
llevada
a
cabo
por
GlyT2.
Así,
observamos
que
la

actividad
de
GlyT2
aumenta
de
un
modo
dependiente
del
tiempo
en
presencia
de

PGE2,
llegando
a
alcanzar
un
aumento
del
transporte
del
66,43
±
6,3%
a
los
60

minutos,
pero
detectándose
a
los
30
min
con
una
activación
significativa
del
32,33

±
4,1%.

Figura
1.-­-
PGE2
activa
el
transporte
mediado
por
GlyT2
en
sinaptosomas
de
médula
espinal

de
rata.
Los
sinaptosomas
de
médula
espinal
de
rata
fueron
incubados
durante
los
tiempos

indicados
en
presencia
de
10
µM
PGE2.
Se
determinó
la
cantidad
de
glicina
tritiada
incorporada,

midiendo
cada
tiempo
ensayado
por
cuadruplicado,
y
se
muestra
la
media
resultante
de
cuatro

experimentos
±
SEM
(error
estándar
de
la
media).
La
comparación
entre
los
distintos
tiempos
se

realizó
mediante
el
análisis
de
la
varianza
(ANOVA).
Los
niveles
de
significación
corresponden
a
*
p

<
0,05
y
***
p
<
0,001.

La
PGE2
es
liberada
durante
eventos
de
dolor
inflamatorio,
y
puede
realizar

su
efecto
a
través
de
cuatro
posibles
receptores:
EP1,
EP2,
EP3
y
EP4.
Estos

receptores
se
expresan
en
una
amplia
de
mayoría
tejidos,
incluyendo
la
médula

espinal
(22,
23)
y
median
su
acción
a
través
de
diferentes
cascadas
de
señalización

(24,
25).
Para
determinar
la
implicación
de
los
distintos
subtipos
de
receptores
en

la
activación
de
GlyT2
por
PGE2,
quisimos
cuantificar
la
expresión
de
cada
uno
en

sinaptosomas
de
médula
espinal
de
rata.
De
este
modo,
la
expresión
del
receptor,

que
está
estrechamente
ligada
a
su
posible
acción,
indica
la
capacidad
de

transducción
de
esa
vía
en
concreto
en
la
muestra
de
interés.
Así,
mediante
la

440