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VOL. 74 (2), 229-256, 2008 DISEÑO Y DESARROLLO DE NUEVAS...

Buffer 5X» (Promega, EE.UU.) y el kit «Bio-Rad Dc Protein Assay»
(Bio-Rad Laboratories, EE.UU.). Para evaluar la viabilidad se utilizó

el reactivo «Alamar Blue» (Trek Diagnostic System, Inglaterra).

1.3. Cultivos celulares

Las líneas celulares empleadas en este estudio fueron HepG2
(células de hepatocarcinoma humano) y CT26 (células de cáncer
de colon de ratón) (American Type Culture Collection, MD, EE.UU.).
Se mantuvieron a 37º C en atmósfera humidificada con un 5% de CO2.
El medio de cultivo utilizado fue DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle
Medium-High Glucose con 4500 mg/L de glucosa y Glutamax-I) suple-
mentado con 10% de suero fetal bovino (FBS), penicilina (100 U/mL)
y estreptomicina (100 µg/mL). Todos los productos empleados en
los cultivos celulares se obtuvieron de Invitrogen Life Technologies
(Reino Unido).

2. Métodos

2.1. Purificación del plásmido

El plásmido empleado en los estudios (pCMVLuc) se obtuvo tras
el crecimiento de bacterias E.coli modificadas en placas de cultivo
de agar-agar con kanamicina a una concentración de 50 µg/mL. Se
tomó una unidad formadora de colonias y se creció primero en 5 mL
de precultivo LB Broth (1% p/v peptona de caseína, 0,5% p/v de ex-
tracto de levadura y 0,5% p/v de NaCl), y kanamicina (50 µg/mL)
durante 4 horas a 37º C, y después en 2 L del mismo medio durante
12 horas a la misma temperatura bajo agitación orbital en un agita-
dor Shaker modelo 625 (New Brunswick Scientific, Co. Inc, Edison,
EE.UU.).

Tras la centrifugación de las bacterias a 6.000 r.p.m. y 4º C du-
rante 15 minutos en una centrífuga Beckman J2-HS, la purificación
se llevó a cabo con el kit «Qiagen Endofree® Plasmid Giga». Una vez
purificado, el plásmido fue resuspendido en 1 mL de agua estéril. La
concentración y pureza del plásmido se determinó mediante espec-

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