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GEMMA NAVARRO DÍEZ Y C. TROS DE ILARDUYA AN. R. ACAD. NAC. FARM.

MATERIAL Y MÉTODOS

1. Material

1.1. Material génico

El DNA plasmídico (pDNA) utilizado que contiene el gen de la
luciferasa bajo el promotor del citomegalovirus (CMV), fue el pCMV-
Luc (VR-1216), (BioServe Biotechnologies, EE.UU.). Su crecimiento
se llevó a cabo en Escherichia coli XL-12 y su purificación con «Quia-
gen Endofree® Plasmid Giga Kit» (Quiagen, Alemania).

1.2. Productos y reactivos

Los dendrímeros de poliamidoamina (PAMAM) con etilendiami-
na (EDA) como iniciador tetravalente de la polimerización fueron
obtenidos de Sigma-Aldrich. Para este estudio se utilizaron las gene-
raciones cuarta, G4 (EDA) y quinta G5 (EDA) con un peso molecular
de 14.215 Da y 28.826 Da, y un número de grupos amino terminales
de 64 y 128, respectivamente.

Para el crecimiento e identificación del plásmido y para las elec-
troforesis en gel de agarosa se utilizó: agar, medio LB Broth, agarosa
D-1 Baja EEO (Pronidasa, España), kanamicina (Sigma-Aldrich,
EE.UU.), tampón Tris-bórico-EDTA (TBE) formado por Tris 0.1 M,
ácido bórico 0,09 M y EDTA 0,01 M (Invitrogen Life Technologies,
Reino Unido), bromuro de etidio (50 µL/mL) (Gibco BRL® Life Tech-
nologies, EE.UU.), desoxirribonucleasa I (Invitrogen Life Technolo-
gies, Reino Unido), glicerol (Invitrogen Life Technologies, Reino Uni-
do) y azul de bromofenol (Sigma, EE.UU.).

Las nanopartículas se prepararon en buffer Hepes Glucosado
a partir de HEPES (Sal sódica) y D– (+) - Glucosa (Sigma-Aldrich,
Alemania).

Para la disociación de los complejos se utilizó: sal sódica de
heparina (Sigma, Alemania), EDTA (Sigma-Aldrich, EE.UU.) y lauril
sulfato sódico (Roig Farma, España).

Para los estudios de transfección in vitro se utilizaron los reacti-
vos «Luciferase Assay Sustrate» (Promega, EE.UU.), «Reporter Lysis

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