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JOSÉ-PÍO BELTRÁN Y COLS. ANAL. REAL ACAD. NAC. FARM.

chnik, Germany). Las plantas se cultivaron en fitotrones a 21ºC en
condiciones de día largo (16h luz, 8h oscuridad), iluminadas con
lámparas fluorescentes de luz blanca fría (150 µE m-2 sec-1), en una
mezcla (1:1:1) de turba:perlita:vermiculita). Las plantas de tabaco
(Nicotiana tabacum cv. Petite Havana SR1; IBMCP) se cultivaron en
una mezcla (1:1) de turba:vermiculita con un fotoperiodo de 16h en
el invernadero a 25ºC (día) y 18ºC (noche). Se les suministró una
iluminación suplementaria con lámparas de 400w Phillips HDK/400
HPI [R] [N]. Las plantas de tomate (Solanum lycopersicon cv. Micro-
Tom; IBMCP) se cultivaron en las mismas condiciones en el inver-
nadero. Las plantas de tabaco y tomate se regaron con una solución
nutritiva Hoagland No. 1 (16) suplementada con oligoelementos. Las
plantas de Arabidopsis y colza se regaron con agua y una vez por
semana con la solución nutritiva.

2. Preparación de muestras vegetales para microscopía
confocal y electrónica de barrido (SEM).

Las muestras vegetales se introdujeron en p-formaldehído al 4%
(p/v) en 1XPBS pH 7,0 inmediatamente después de su recolección
para ser fijadas. Posteriormente, fueron sometidas a dos o tres pul-
sos de vacío de 3 min. cada uno, se les cambió la solución fijadora
por una fresca y se mantuvieron en ella durante toda la noche a 4ºC.
Tras el proceso de fijación de los tejidos se lavaron con 1XPBS y se
deshidrataron hasta etanol absoluto mediante una serie de lavados
sucesivos de 30 minutos a 4ºC en soluciones crecientes de etanol
(15%, 30%, 50%, 70%, 85%, 96%, 100%). A partir de este punto, las
muestras sufrieron un proceso distinto en función de si fueron in-
cluidas en parafina (Paraplast Plus, Sigma), o procesadas para ser
analizadas por microscopía electrónica de barrido (SEM).

Para su inclusión en parafina, las muestras se introdujeron en
soluciones crecientes de Histo-Clear en etanol (25%, 50%, 100% de
Histo-Clear) y posteriormente se incluyeron gradualmente en series
crecientes de parafina en Histo-Clear a 58ºC hasta llegar a parafina
absoluta. Tras dos días en parafina absoluta en los cuales se iban
haciendo cambios a parafina fresca, las muestras se colocaron en
moldes adecuados para seccionarlas. Se mantuvieron a 4ºC hasta su

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