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JOSÉ-PÍO BELTRÁN Y COLS. ANAL. REAL ACAD. NAC. FARM.

construcción pBI-PsEND1::barnasa-barstar. Las plantas se fotogra-
fiaron con una cámara Nikon F-601 M, acoplada a una lupa MZ8
(Leica). Las anteras de las plantas PsEND1::barnasa fueron fijadas y
observadas por SEM (microscopía electrónica de barrido) y micros-
copía óptica. Para el análisis fenotípico de dichas plantas
PsEND1::barnasa de la generación T2, se realizó un análisis de segre-
gación del fenotipo androestéril para determinar el índice de la se-
gregación del transgén para 4 líneas transgénicas independientes en
función de la proporción de plantas estériles frente a plantas fértiles
obtenidas. Para ello, las semillas provenientes del cruce de líneas
independientes T1 con plantas silvestres, se sembraron en alvéolos
individuales para cada una. Se observó el fenotipo de las plantas
resultantes en cuanto a morfología de las anteras y formación de
frutos para cuantificar el porcentaje de esterilidad de las plantas
germinadas.

6. Evaluación del número de ramas y flores en plantas
PsEND1::barnasa de Arabidopsis thaliana

Para la evaluación del número de flores producidas en relación
con las producidas por una planta sin transformar se sembraron un
total de 78 semillas de Arabidopsis thaliana; 18 de las cuales perte-
necían al ecotipo silvestre Columbia y, las 60 restantes eran semillas
resultantes del cruce de líneas independientes PsEND1::barnasa con
plantas de genotipo silvestre. Las semillas fueron sembradas en al-
veolos de plástico de 6,5 x 6,5 x 5 cm. en una mezcla de
turba:perlita:vermiculita (1:1:1). Se colocaron en bandejas dentro de
cámaras de cultivo y se regaron por inmersión en una solución de
Hoagland número 1 suplementada con oligoelementos. Tras la siem-
bra, las bandejas se cubrieron con plástico para mantener la hume-
dad. Se mantuvieron en oscuridad a 4ºC durante 72 horas a fin de
sincronizar la germinación y al cabo de esos días se pasaron a ca-
binas. Al aparecer el primer par de hojas, se agujereó el plástico que
recubría las bandejas y, terminó eliminándose por completo al cabo
de tres días.

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