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R. HERNÁNDEZ, T. TERUEL Y M. LORENZO CERAMIDA Y RESISTENCIA A LA INSULINA
La insulina estimula la incorporación de glucosa a las células principal-
mente por su capacidad de reclutar el transportador de glucosa GLUT4
desde compartimentos intracelulares a la superficie celular. Por ello qui-
simos determinar si los efectos inhibitorios del ML-9 en el transporte de
glucosa inducido por insulina eran debidos al bloqueo de la capacidad de
la insulina para translocar el transportador GLUT4. Utilizamos dos
aproximaciones distintas: 1.- medida de la cantidad de GLUT4 en las
fracciones subcelulares de membrana interna y membrana plasmática por
Western blot en adipocitos marrones pretratados con el inhibidor y poste-
riormente estimulados con insulina, y 2.- estudios de translocación por
inmunofluorescencia en células HeLa cotransfectadas con el plásmido de
expresión GFP-GLUT4 (GLUT4 unido a una proteína verde fluorescente,
que permite visualizar su localización mediante microscopía de fluores-
cencia) y con la construcción dominante negativa de Akt [29] (Fig. 3).
Los resultados de dichos experimentos confirmaron que la activación de
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