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R. HERNÁNDEZ, T. TERUEL Y M. LORENZO CERAMIDA Y RESISTENCIA A LA INSULINA

el transporte de glucosa y sobre la expresión génica de GLUT4 en adipo-
citos marrones a través de la generación de ceramidas.

RESULTADOS Y DISCUSION

IMPORTANCIA DE AKT/PKB EN LA REGULACIÓN POR INSULI-
NA DEL TRANSPORTE DE GLUCOSA Y DE LA EXPRESIÓN GÉ-
NICA DE GLUT4 EN ADIPOCITOS MARRONES FETALES DE RA-
TA EN CULTIVO PRIMARIO

Como el transporte de glucosa en adipocitos marrones fetales es
estimulado por la insulina, quisimos estudiar en primer lugar si era in-
hibido en presencia de inhibidores químicos de la ruta de señalización de
la insulina. Para ello, partimos de un cultivo primario de adipocitos ma-
rrones fetales cultivados en un medio con 10% de suero fetal durante 5
horas. A continuación se retiró el suero a las células y se mantuvieron
durante 20 horas en un medio suplementado con 0.2% de BSA. Para la
medida del transporte de glucosa las células control o pretratadas durante
30 minutos con LY294002 10 PM o rapamicina 25 ng/ml en el medio
KRP, se estimularon con insulina 10 nM durante 30 minutos. La incorpo-
ración de 2-deoxi-D-(1-H3) glucosa se midió durante los últimos 10 minu-
tos del cultivo. La figura 2A muestra que las células tratadas con insulina
presentan un aumento en la incorporación de glucosa de tres veces respec-
to a las células control. Por otra parte el compuesto LY494002, que inhibe
la actividad PI3-quinasa estimulada por insulina y consecuentemente la
fosforilación de las dianas que están por debajo de ella, como Akt/PKB y
p70S6 quinasa inhibe completamente los efectos de la insulina sobre el
transporte de glucosa. La proteína p70S6 quinasa es fosforilada en res-
puesta a insulina, sin embargo bloqueando únicamente su fosforilación
con la rapamicina no se observan cambios en la incorporación de glucosa
inducida por insulina. Estos resultados indican que la insulina aumenta el
transporte de glucosa en los adipocitos marrones a través de una vía de
señalización que implica a la PI3-quinasa y a otras dianas situadas por
debajo de ella diferentes de p70S6 quinasa.

Utilizando un compuesto químico (ML-9) recientemente propues-
to como inhibidor de la actividad Akt, [27] pudimos comprobar que
efectivamente en los adipocitos marrones en cultivo dicho compuesto

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