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ANALESRANFwww.analesranf.comfarmacol%u00f3gicos in vivo. Nuestro modelo seprotegi%u00f3 mediante patente espa%u00f1ola (60) concobertura internacional.Sobre la base de hallazgos previos quemostraban que concentraciones muy bajas deFV daban lugar a modelos animales no viables,se tom%u00f3 la decisi%u00f3n de generar un modelo defenotipo leve (aproximadamente del 25% deFV con respecto al de referencia), replicandouna mutaci%u00f3n humana que da lugar a unfenotipo leve de la enfermedad en una regi%u00f3nconservada del FV de mam%u00edfero. Lacaracterizaci%u00f3n del fenotipo se realiz%u00f3mediante ensayos de coagulometr%u00eda paradeterminar la funcionalidad de la prote%u00edna, eltiempo de protrombina y el tiempo detromboplastina parcial activada.Se realiz%u00f3 un estudio previo in silico paraseleccionar una mutaci%u00f3n causante de unfenotipo leve de la enfermedad en humanos(Thr1898Met) (61). Dicha mutaci%u00f3n se replic%u00f3en ratones (Thr1857Met) mediante edici%u00f3ng%u00e9nica dirigida por homolog%u00eda mediada porCRISPR y por microinyecci%u00f3n directa, en elcitoplasma de cigotos, de los componentesplasm%u00e1ticas correspondientes a los diferentesniveles de gravedad de la deficiencia de factorV, se puede argumentar que la correcci%u00f3nlograda en este estudio podr%u00eda, en condicionesideales, ser suficiente para convertir unfenotipo grave en uno leve asintom%u00e1tico.5. OBTENCI%u00d3N DE UN MODELO ANIMALPATOL%u00d3GICO EN RAT%u00d3N DEFICIENTE ENFACTOR V MEDIANTE EDICI%u00d3N G%u00c9NICA YMICROINYECCI%u00d3N DIRECTA EN CIGOTOSUna vez establecido el modelo celular condeficiencia en FV, se inici%u00f3 el desarrollo de unmodelo animal patol%u00f3gico en rat%u00f3n, utilizandola tecnolog%u00eda CRISPR/Cas9 y microinyecci%u00f3ndirecta en cigotos, que sirviera para losposteriores estudios in vivo de prueba deprotocolos de terapia g%u00e9nica (Figura 5). Deb%u00edade ser un modelo viable, como as%u00ed se demostr%u00f3en nuestros estudios, resultado %u00e9ste que dabala m%u00e1xima originalidad al modelo porque lospreviamente descritos nunca lo fueron y enconsecuencia no ten%u00edan utilidad en estudiosD%u00e9ficit de factor V y terapias avanzadasAntonio Liras et al. 35 An. R.Acad. Farm.Vol. 91. n%u00ba 1 (2025) %u00b7 pp. 17-44Figura 4. Obtenci%u00f3n de un modelo celular deficiente en factor V mediante edici%u00f3n g%u00e9nica, y su correcci%u00f3n(Cas9, prote%u00edna asociada a CRISPR; CRISPR, repeticiones palindr%u00f3micas cortas agrupadas y regularmenteinterespaciadas; del, deleci%u00f3n; FV, factor V; pb, pares de bases; PAM, motivo adyacente al protoespaciador;sgRNA, ARN gu%u00eda %u00fanico; TT, modelo celular tratado).