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ANALESRANFwww.analesranf.com1.8. Edici%u00f3n g%u00e9nica con CRISPR. La%u201cherramienta%u201dLas posibilidades de transg%u00e9nesis hanevolucionado significativamente, desde losprimeros m%u00e9todos de inyecci%u00f3n pronuclearhasta las modernas t%u00e9cnicas de edici%u00f3n degenes que permiten una manipulaci%u00f3ngen%u00e9tica precisa (40). Adem%u00e1s, las t%u00e9cnicas detransg%u00e9nesis han permitido la creaci%u00f3n demodelos animales con genes informadores(reporter genes), que facilitan el estudio dela expresi%u00f3n g%u00e9nica y la actividad de prote%u00ednasen tiempo real en un organismo vivo.El sistema CRISPR (Clustered RegularlyInterspaced Short Palindromic Repeats oRepeticiones Palindr%u00f3micas Cortas Agrupadasy Regularmente Espaciadas), en particular, harevolucionado el campo de la transg%u00e9nesis alpermitir la edici%u00f3n g%u00e9nica dirigida y eficienteen una amplia gama de organismos. Estatecnolog%u00eda ha hecho posible la generaci%u00f3n demodelos animales que contienen mutacionesespec%u00edficas, lo que es esencial para el estudiode enfermedades gen%u00e9ticas y el desarrollo denuevas terapias (41). Inicialmente descubiertoen bacterias, CRISPR es un sistema inmuneadaptativo que permite a los microorganismosdefenderse contra virus invasores, conocidoscomo bacteri%u00f3fagos. Funciona en combinaci%u00f3ncon prote%u00ednas asociadas, siendo Cas9 (CRISPRassociated protein 9) la m%u00e1s utilizada enbiotecnolog%u00eda para la edici%u00f3n gen%u00e9tica (42).El avance clave en la aplicaci%u00f3n de CRISPRen biotecnolog%u00eda se produjo en 2012, cuandoJennifer Doudna y Emmanuelle Charpentierdemostraron que el sistema CRISPR/Cas9pod%u00eda ser reprogramado para cortar ADN ensecuencias espec%u00edficas en organismoseucariotas, incluyendo c%u00e9lulas humanas. Estedescubrimiento abri%u00f3 la puerta a la edici%u00f3ng%u00e9nica dirigida, permitiendo realizarmodificaciones precisas en el genoma de unamanera m%u00e1s r%u00e1pida, eficiente y econ%u00f3mica quecon tecnolog%u00edas anteriores como las nucleasasde dedo de zinc (ZFNs) y las nucleasas TALEN(42).procedimientos ni estudios de una enfermedadni de un tratamiento. En 1996 Cui ycolaboradores (37) obtuvieron el primermodelo deficiente en FV mediante la t%u00e9cnicade recombinaci%u00f3n hom%u00f3loga. Lo que seobserv%u00f3 es que aproximadamente la mitad delos individuos homocigotos se reabsorb%u00edan entorno al d%u00eda E9-10 del periodo embrionario,posiblemente debido a una anomal%u00eda en elsaco vitelino. El resto de los animaleshomocigotos que llegaron a t%u00e9rmino, murierondebido a una hemorragia masiva en las 2 horasposteriores al nacimiento. Se postula que estoes debido a la falta de trombina, relacionadacon receptores PAR que son fundamentalespara el desarrollo embrionario. En aquellosratones con anomal%u00edas en estos receptores seproducen lesiones vasculares en el sacovitelino y defectos en las paredes de grandesvasos. A%u00f1os m%u00e1s tarde, el mismo grupo deinvestigaci%u00f3n estudi%u00f3 los requerimientos delFV en la embriog%u00e9nesis y en la hemostasia enratones, generando l%u00edneas de ratonestransg%u00e9nicos que expresaban un minig%u00e9n delFV bajo el control de los promotoresespec%u00edficos de tejido de alb%u00famina (Malb) o delfactor 4 plaquetario de rata (Rpf4). A pesar delbajo nivel de expresi%u00f3n del transg%u00e9n de FV, seobserv%u00f3 la recuperaci%u00f3n del fenotipo letal. Sinembargo, la recuperaci%u00f3n parec%u00eda serincompleta, con una p%u00e9rdida continuada dem%u00e1s de la mitad de los ratones esperadosdurante la embriog%u00e9nesis temprana. Seconcluy%u00f3 que la presencia de FV en nivelesinferiores al 0,1% es suficiente para permitirla supervivencia postnatal (38).Recientemente, Weyand y colaboradores (39)obtuvieron el primer modelo con d%u00e9ficit de FVmediante la t%u00e9cnica CRISPR/Cas9 en pezcebra, cuya hemostasia presentasorprendentes similitudes con la hemostasiaen humanos, generando un modelo KOdeficiente mediante la deleci%u00f3n de 49 paresde bases en el ex%u00f3n 4 del gen F5. Aunque laembriog%u00e9nesis de los individuos homocigotosno sufri%u00f3 ninguna alteraci%u00f3n, estos individuoss%u00ed experimentaron hemorragias fatales en laedad adulta.D%u00e9ficit de factor V y terapias avanzadasAntonio Liras et al. 29 An. R.Acad. Farm.Vol. 91. n%u00ba 1 (2025) %u00b7 pp. 17-44