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ANALESRANFwww.analesranf.commejorar las titulaciones del vector y lainfectividad. Adem%u00e1s, de esta forma, eltransg%u00e9n utilizado sintetiza, tras integrarse,una prote%u00edna FV directamente activada yfuncional que pueda intervenir en la cascadade la coagulaci%u00f3n.Los resultados del experimento detransducci%u00f3n in vitro con el vector lentiviralen c%u00e9lulas HepG2 mutadas en el gen F5,demostraron una relaci%u00f3n clara y proporcionalentre la dosis del vector y la actividad de FV.Por un lado, los valores obtenidos respecto delas c%u00e9lulas WT (nativas) y mutadas sintransfectar con el vector lentiviral, seajustaban a los descritos m%u00e1s arriba (Figura4). A medida que se incrementa la dosis delvector, se observa una reducci%u00f3n progresiva enlos tiempos de coagulaci%u00f3n y un aumentosignificativo en la actividad de FV, lo quesugiere que el vector recombinante con eltransg%u00e9n de FV restaura la funcionalidad delFV en las c%u00e9lulas mutadas. Sin embargo, no seobservaron aumentos pronunciados entre lasdosis m%u00e1s altas (MOI 5 vs MOI 10) en t%u00e9rminosde tiempos de coagulaci%u00f3n y actividadporcentual, lo que sugiere que puede haber unbasar en las condiciones cl%u00ednicas del pacientereceptor. En nuestro caso, nuestra pacientetiene una muy alta predisposici%u00f3n a sufrirgraves efectos anafil%u00e1cticos con plasma frescocongelado y otros productos sangu%u00edneos. Poresta raz%u00f3n nuestra elecci%u00f3n del vector sedirigi%u00f3 sin lugar a duda hacia los vectoreslentivirales. Esta estrategia con vectorlentiviral, permite la integraci%u00f3n del genterap%u00e9utico en las c%u00e9lulas del hu%u00e9sped,proporcionando, te%u00f3ricamente, una expresi%u00f3nsostenida de la prote%u00edna FV.La prueba de concepto para el protocolo deterapia g%u00e9nica lentiviral (Figura 6), se llev%u00f3 acabo, en primer lugar, a trav%u00e9s de estudios invitro en c%u00e9lulas HepG2 nativas y mutadas enel gen F5 como se describi%u00f3 m%u00e1s arriba en elmodelo celular de patolog%u00eda (Figura 4).Respecto al constructo del vectorrecombinante se parti%u00f3 de la base del %u00e9xito delos constructos de mol%u00e9culas de FVIII (62), y seelabor%u00f3 un transg%u00e9n de FV humano activado enel cual se elimin%u00f3 la secuencia codificante deldominio B (funci%u00f3n solamente estructural dela prote%u00edna), permitiendo reducir el tama%u00f1odel empaquetamiento en el vector y pudiendoD%u00e9ficit de factor V y terapias avanzadasAntonio Liras et al. 37 An. R.Acad. Farm.Vol. 91. n%u00ba 1 (2025) %u00b7 pp. 17-44Figura 6. Prueba de concepto de terapia g%u00e9nica lentiviral para la correcci%u00f3n in vitro e in vivo de la mutaci%u00f3n en elgen F5 (FVa, factor V activado; FV, factor V; MOI, dosis del virus o multiplicidad de infecci%u00f3n; pb, pares de bases;SP, p%u00e9ptido se%u00f1al)