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ciónsetransfirióaunamembranadefluorurodepolivinilideno(PVDF)(GEHealthcareMadridEspaña)con Trans-Blot Turbo(BioRadMadridEspaña)durante20miny25mALasmembranassebloquearonconalbúminaséricabovina(BSA)al 5%durante1horayseincubaronconelanticuerpoprimarioSODsc-11407;CAT:sc-271803;GRsc-32886;GPxsc-133160;HO1sc-136960(SantaCruzBiotechnology,QuimigenMadridEspaña)durantetodalanochea 4ºCElanticuerposecundarioconjugadoconperoxidasa(SantaCruzBiotechnology,QuimigenMadridEspaña)seincubódurante1horaatemperaturaambienteLaseñaldequimioluminiscenciasedetectóempleandoelECLSelect-kit(GEHealthcareMadridEspaña) y seleyóenunImageQuantLAS 500(GEHealthcareMadridEspaña)LadensidaddebandasecuantificóempleandoelprogramaQuantityOne v.426ysecuantificóenreferenciaalaβ-actinacomocontroldecargaLacuantificacióninmunohistoquímicaserealizósegúnlatécnicadescritaporGarcimartínetal.(38)Lasmuestrasseincubaronconloscorrespondientesanticuerposespecíficospoliclonalesprimariosysecundariosbiotinilados(SantaCruzBiotechnology,QuimigenMadrid)Elsistemadedetecciónserealizóusandoperoxidasaconjugadaconestreptavidina(SigmaAldrichMadrid)y serevelóporincubacióncon 33′-diaminobenzidina(DAB)(SigmaAldrichMadrid)LainmunorreactividadsedeterminóporanálisisdeimagenusandounmicroscopioópticoLeicaDMLB2acopladoaunacámaradigitalLeicaDFC320(LeicaMadridEspaña)ParamedirlainmunorreactividaddeNPC1L1ACAT2yMTP,laspreparacionesfueronestudiadasasignandounapuntuaciónacadaunadeellasbasándonosenlaintensidaddetinción(de1a4)oelporcentajedecélulasteñidasencadamuestra26 AnálisisestadísticoLosresultados fueronexpresadoscomomedia ydesviaciónestándar.SerealizólapruebadeLevenepararatificarodescartarlaigualdaddelasvarianzasentrelosgruposcomparadosLas25dDeterminaciones enzimáticas en elintestino delgadoSedeterminólaactividaddelasenzimasantioxidantesenhomogenadosdelasmuestrasdeduodenoyeyunoeíleonentampónfosfato(50mMpH74)ParamedirlaactividadSODseempleóelmétodoNitroblue Tetrazolium(NBT)adaptadoporSantos-Lópezetal.(31)EstemétodosebasaenlaproduccióndelradicalsuperóxidoporautooxidacióndehidroclorurodehidroxilaminaquereduceelNBTanitritoLareacciónentrenitritoyEDTAdalugaracomplejoscolorimétricosquesemidierona560nmLaactividadenzimáticaresultante seexpresócomoUI/mgproteínaLaactividadCATsedeterminócomodescribeAebi(32)midiendoa 240nmladescomposicióndeH2O2;laactividad seexpresócomoUI/mgdeproteínaa 25°CLaactividadGRseevaluóempleandoelmétododescritoporMannervik(33)queconsideralareduccióndedisulfurodeglutatiónporNADPHyseexpresócomonanomoldeNADPHoxidadoaNADP+porminuto ypormiligramodeproteínaLaactividadGPxseanalizósiguiendoelmétododeAgarkovetal.(34)enelquesecuantificalaoxidacióndeNADPHcuandoelglutatiónoxidadosereduceporGRconH2O2comosustratoLaactividadGPxseexpresócomonanomoldeNADPHoxidadoaNADP+porminutoypormiligramodeproteínaDadoquelaabsorcióndelípidosacontecefundamentalmenteenel yeyuno(35)sedeterminaronenestesegmentointestinallosnivelesproteicos(abundancia)delascuatroenzimasantioxidantes(SODCAT,GRyGPx)yHO1porWesternBlotsiguiendoelprotocolodescritoenMacho-Gonzálezetal.(36)LasmuestrassehomogeneizaroncontampóndelisisquecontieneTris-HCl10mM(pH74)SDSal1%vanadatodesodio1mMy001%cóctelinhibidordeproteasa(todosdeSigma-Aldrich)Laproteínaintestinal semidióutilizandoelmétododeLowry(37) Sesepararoncantidadesigualesdeproteína(30 µg)a150Vengeldepoliacrilamida(SDS-PAGE)al8%(v/v) y,despuésdelamigra226ANALESRANFwwwanalesranfcomProtectiveeffectsofproanthocyanidinsattheintestinallevelagainstthermooxidative stressdue toingestionof sunfloweroilusedin fryingRocíoRedondo-Castillejoet alAnRealAcadFarmvol87nº3(2021)·pp221-237Losdatoscorrespondenalos valoresmediosde tresdeterminaciones AGaceitedegirasol;CPCompuestospolares;PTGpolímerosde triglicéridos;DTGdímerosdetriglicéridos; TGt triglicéridos totales; TGNox triglicéridosnooxidados; TGox triglicéridosoxidados;DGdiglicéridos;MGmonoglicéridos; AGLácidosgrasoslibresTabla1Compuestosdealteracióntermooxidativaehidrolíticaenelaceitedegirasolsinusarytras28friturasdepescado