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RANF

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Tabla 2: Concentraciones inhibitorias y letales de los distintos anti- tencia a los antibióticos AmP, cAZ, crO y ctX, tal como se observó
bióticos a E. coli, GNCA, Anc 26, Anc 75, Anc 90 y Anc 92 anteriormente (risso, Gavira et al. 2013). Además, las bacterias E.
coli no transformadas son susceptibles a todos los compuestos utili-
resistencia a E. coli, Anc 75, GNCA Anc 26 zados en este trabajo, por lo tanto, la resistencia a los antibióticos
los fármacos Anc 90 y Anc 92 MLC MIC MLC MIC se debe específicamente a las ß-lactamasas recombinantes expre-
sadas por el plásmido pAcse3 (tabla 2). estos datos demuestran
Antibiótico MLC1 MIC1 que nuestro sistema es efectivo para poder determinar la actividad
hidrolítica de distintas ß-lactamasas.

AmP 1 0,5 32 16 32 8 3.3. Obtención de MIC y MLC de cada gen

Atm 0,0313 0,0156 0,5 0,25 256 128 A partir de los datos obtenidos se obtiene los valores de
MICs de cada una de las ß-lactamasas estudiadas frente a cada uno
cAZ 0,125 0,0625 0,5 0,125 32 16 de los antibióticos utilizados. se determinó también de manera se-
parada el valor de la mínima concentración letal de antibiótico (MLC
crO 0,125 0,0313 64 8 16 4 del inglés “minimal lethal concentration”) ya que es un error fre-
cuente considerar los valores de MIC y MLC equivalentes, cuando en
ctX 0,0625 0,0313 64 8 4 2 realidad el valor de MIC corresponde a la concentración de antibió-
tico que inhibe el crecimiento bacteriano y que no tiene por qué
cXm 0,5 0,25 512 256 4 2 coincidir con el valor MLC. Los valores MIC y MLC de cada uno de
las ß-lactamasas utilizadas, así como el control de E. coli no trans-
FeP 0,0313 0,0313 2 0,25 2 1 formada y controles aparecen en las tablas 2 y 3.

ImP 0,0625 0,0313 0,125 0,0625 0,0625 0,0313 Los resultados muestran que las cuatro ß-lactamasas uti-
1 los valores mIc y mLc se muestran en µg/mL lizadas en este estudio presentan distintos grados de resistencia a
los antibióticos analizados, mientras que, de las ß- lactamasas an-
utilizados y en el caso de que la presenten, establecer esos valores cestrales observados en este estudio, sólo el producto de expresión
como base. de Anc26 muestra resistencia a todos los antibióticos utilizados excepto
frente a ImP, mientras que el resto no resultaron activas.
Los resultados obtenidos demuestran en nuestro sistema,
que el gen GncA se expresa como una proteína que presenta resis-

Tabla 3: Concentraciones inhibitorias y letales de los distintos antibióticos frente a las ß-lactamasas actuales

BKC-1 KLUG-1 KPC-1 sme-1

Antibiótico MLC1 MIC1 MLC MIC MLC MIC MLC MIC
64 8192 2048 128 16 32 8
AmP 512 0.0313 0.5 2 0,25 256 128
0.25 4 0.125 0.25 0,125 32 16
Atm 2 0.5 0.25 32 1 8 16 4
0.125 128 16 0.125 8 4 2
cAZ 1 4 64 512 16 256 4 2
0.0625 2048 0.0625 0,25 2 1
crO 16 0.25 32 2 1 0,0625 0,0625 0,0313
0.125 0.0313
ctX 4

cXm 128

FeP 0.5

ImP 0.5
Los valores mIc y mLc se muestran en µg/mL

Ancestral reconstruction of a b-lactamase and comparison with

162 its extant proteins
Gonzalo Fernández Balaguer, Carmen Del Águila, Carolina Hurtado Marcos y Rubén Agudo Torres
An. Real Acad. Farm. Vol. 87. Nº 2 (2021) · pp. 155 - 170