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ANALES hidrolíticas que presentan las ß-lactamasas estudiadas y sirve para
validar la metodología de reconstrucción de proteínas ancestrales.
RANF
La clasificación de las enzimas estudiadas según el índice
www.analesranf.com de actividad establecido en este trabajo es KLuG-1 > sme-1> Anc
26 > bKc-1 > KPc-1. sin embargo, aunque KLuG-1 es la ß-lac-
3.4. Obtención del mejor generalista y el mejor especia- tamasas que presenta los valores más altos de resistencia frente al
lista mayor número de antibióticos, es el producto génico ancestral Anc
26 el más generalista al mostrar resistencia a mayor número de an-
Para tener una mejor comprensión de los resultados, se tibióticos (tabla 5), siendo sensible únicamente a imipenem, un an-
decidió analizar que enzima presenta resistencia a mayor número tibiótico altamente resistente a la acción de las ß-lactamasas (42).
de antibióticos (más generalista) y cual es el más resistente a cada Aunque es cierto que los antibióticos utilizados en este estudio son
uno de los ß-lactámicos (más especialista). Para este análisis se cal- sintéticos o semi-sintéticos, se considera que los genes ancestrales
cula el logaritmo en base 2 de los valores MLC obtenidos en cada codifican proteínas más generalistas que pueden evolucionar
caso (tabla 4). De este modo se obtiene un valor arbitrario adimen- mediante selección convirtiéndose en genes especialistas (43, 44).
sional que sirve para comparar fácilmente la actividad de los dis-
tintos genes estudiados en este trabajo (tabla 5). esta idea se sustenta aún más cuando existen ciertos
estudios que demuestran que las ß-lactamasas evolucionaron
en relación a las ß-lactamasas actuales, los resultados de- directamente de las PbPs (enzimas contra las que actúan los
muestran que KLuG-1 es la ß-lactamasa más generalista de las ß-lactámicos (45).
examinadas en este trabajo, además, presenta los valores de resis-
tencia más altos frente a 5 de los 8 antibióticos estudiados (AmP, se observa en los resultados que el producto génico de
crO, ctX, cXm y FeP), mientras que sme-1 es la que presenta los Anc 26, es el más resistente frente a ceftazidima (cAZ). esta
valores más altos de resistencia frente a Atm e ImP, siendo la única cefalosporina se caracteriza por ser un antibiótico estratégico,
enzima de las seleccionadas que presenta resistencia a este carba- debido a que no se utiliza a gran escala en el ámbito hospitalario.
penem. Finalmente, el producto del gen Anc 26 presenta el mayor es posible que este hecho haya impedido que las ß-lactamasas
nivel de resistencia frente a ceftazidima de todas las ß-lactamasas actuales analizadas en este estudio no hayan estado suficientemente
estudiadas y se comporta como un generalista intermedio. expuestas a este antibiótico para adquirir una resistencia mayor que
la de la secuencia ancestral. Por el contario, la resistencia mostrada
4. DISCUSIÓN por Anc26 a este compuesto se debería a su promiscuidad inherente.
en este trabajo se han obtenido diferentes secuencias pro- en un estudio en el que se evolucionó in vitro la ESBL ctX-m9 (46),

teicas de ß-lactamasas ancestrales para analizar su actividad y pos-
teriormente compararlas con secuencias actuales. como se establecía
en la introducción, estas enzimas son de vital interés, debido a los
estragos sanitarios que producen y pueden producir en el futuro. es
por ello, que en este trabajo se caracterizó las diferentes actividades

Tabla 4: Resumen de los valores de MLC obtenidos1

1 Los valores mLc se muestran en µg/mL. se indica en color rojo los valores que están por encima del límite de sensibilidad (resistentes), en negro los valores que están
en el límite de sensibilidad y en azul los valores que están por debajo del límite de sensibilidad (sensibles).

Reconstrucción ancestral de una b-lactamasa y comparativa 163

con sus homólogos actuales

Gonzalo Fernández Balaguer, Carmen Del Águila, Carolina Hurtado Marcos Y Rubén Agudo Torres
An. Real Acad. Farm. Vol. 87. Nº 2 (2021) · pp. 155 - 170