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ANALES expresión de los dos receptores a estudiar: ratones homocigotos con-
trol Gpr43+/+ (129SvEvBrd, Deltagen) y RAGE+/+ (C57Bl/6, Lexicon
RANF Genetics Inc.) y ratones transgénicos que sufren la delección del gen
que codifica dichos receptores, ratones Gpr43-/- (129SvEvBrd, Del-
www.analesranf.com tagen) y ratones RAGE-/- C57Bl/6 (Lexicon Genetics Inc.). Los ani-
males se mantuvieron en ciclos de luz-oscuridad de 12:12 horas y
La principal vía proinflamatoria consiste en la expresión del NFkb, tuvieron acceso libre a una dieta standard de laboratorio y agua.
el cual da lugar a la formación de citoquinas inflamatorias como El sacrificio se realizó mediante sobredosis con halotano.
IL-6 o TNFa. A nivel intestinal, se ha comprobado que la unión
AGE-RAGE da lugar a un aumento de la permeabilidad de la mu- En el experimento A, a cuatro grupos de ratones
cosa (20). Así mismo, diversos autores han encontrado que la unión (n = 10) se les indujo una colitis aguda con dextrano sulfato sódico
AGE-RAGE también incrementa el reclutamiento de células infla- (DSS) tras haber ingerido durante 28 días una dieta enriquecida al
matorias como los neutrófilos (21, 22). 3% con la BSA-G o BSA-C (25). Tras este periodo, a los ratones se
les administró el DSS al 4% por medio del agua de bebida durante
Ante las evidencias científicas presentes en la literatura, 7 días y se les monitorizó diariamente el tipo de deposiciones y el
el presente trabajo ofrece resultados a cerca de la influencia que sangrado presente en ellas. El día 7 se sacrificaron los animales, se
una ingesta elevada de AGEs tiene sobre la inflamación intestinal, extrajo el colon y se analizó histológicamente siguiendo procedi-
repercutiendo finalmente en el desarrollo de la enfermedad infla- mientos estándar. Como control se utilizaron 3 animales de cada
matoria intestinal. En este sentido, se evalúa el efecto que ejerce grupo a los que no se les indujo la colitis mediante DSS.
una proteína glicosilada sobre el epitelio intestinal y la subyacente
red inmunitaria, investigando si existe algún tipo de relación entre En el experimento B, a los cuatro grupos de ratones (n =
los receptores RAGE y GPR43. 10) se les indujo una colitis crónica con DSS (10) tras haber ingerido
durante 28 días una dieta enriquecida al 3% con la BSA-G o BSA-
2. MATERIAL Y MÉTODOS C. Tras este periodo, a los ratones se les administró DSS al 2% (ex-
cepto a los grupos control) durante 5 días, seguidos de 5 días donde
2.1 Preparación de las muestras se les suministraba agua normal. Este ciclo se repitió dos veces más
Para obtener una proteína glicosilada rica en carboxime- y los animales fueron sacrificados en el día 30. El avance de la colitis
se monitorizó de igual forma que en el caso de la colitis aguda.
til-lisina (CML), uno de los AGEs que estimula al receptor RAGE, se Como control se utilizaron 3 animales de cada grupo a los que no
siguió la técnica descrita por Valencia et al (23). De forma breve, se se les indujo la colitis mediante DSS.
disuelve albúmina sérica bovina (BSA) en tampón fosfato 150 mM
pH 7.4 que contiene ácido glioxílico y NaBH3CN en concentraciones En el experimento C se estudió el efecto de la ingesta de
25 y 75 mM respectivamente. Esta solución se filtra de forma estéril AGEs durante un periodo largo (90 días), usando los cuatro grupos
y se incuba a 50 ºC durante 48 horas para dar lugar a la BSA glico- de ratones comentados anteriormente y suministrándoles una dieta
silada (BSA-G). De igual forma, la BSA calentada sin ácido glioxílico enriquecida al 3% con BSA-G o BSA-C.
ni NaBH3CN se utilizó como muestra control (BSA-C). Tras la incu-
bación, la BSA se dializa frente a agua para eliminar los restos de Para evaluar el efecto de un tratamiento anti-AGEs sobre
glucosa que no reaccionaron y las sales del tampón y finalmente se la colitis inducida por DSS, en el experimento B tres animales de
liofiliza. La cuantificación del contenido total de CML en la proteína cada grupo se trataron durante 7 días con 100 mg/dosis de exRAGE
glicosilada se realizó mediante GC-MS, utilizando 2H8-CML como (R&D Systems Inc.) tal y como se detalla en la bibliografía (20). El
estándar interno (24). De forma resumida, la muestra se reduce con exRAGE es una proteína quimérica obtenida mediante recombina-
NaBH4 y posteriormente se hidroliza con ácido clorhídrico. Los ami- ción del dominio extracelular del RAGE murino (Gln 24-ALA 342,
noácidos se transforman en sus trifluorometilésteres y se analizan homólogo al sRAGE.
por GC-MS en modo SIM.
2.3. Ensayos histológicos y bioquímicos
2.2. Diseño experimental para los ensayos con anima- Para evaluar el efecto de la ingesta de los AGEs sobre la
les
orquestación de la respuesta inmune mediada por los receptores
Los estudios con animales se realizaron de acuerdo con GPR43 y RAGE, estudiamos diversos signos clínicos, cambios histo-
las directivas de la Convención para la protección de los animales lógicos y producción de citoquinas.
vertebrados usados en experimentación y con otros fines científicos
establecidas por la Unión Europea (85/ETS123; 86/609/EEC) y fue-
ron aprobados por el comité de bioética de la Universidad de Gra-
nada. Se emplearon cuatro grupos de animales que cubrían la
Regulación de la respuesta inflamatoria intestinal mediante la ingesta de 143
compuestos de Maillard y su interacción con los receptores RAGE y GPR43
Silvia Pastoriza y José Ángel Rufián-Henares
An. Real Acad. Farm. Vol. 87. NÀ 2 (2021) · pp. 141 - 154
