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Como se esperaba, VNUT requiere Cl- para su
actividad, no observándose el transporte de nucleótidos en
ausencia de este ion (27). El Br- también activa el
transporte mientras que I-, F-, nitrato, sulfato o tiocianato
fueron inefectivos. Además, los iones I-, F-, nitrato, sulfato secretoras (101).
y tiocianato inhiben el transporte de ATP dependiente de
Cl-. Este requerimiento de aniones es muy similar al de
VGLUT2 (38). Aunque no se han llevado a cabo estudios
cinéticos detallados, esto podría sugerir la existencia de
sitios de unión de aniones y mecanismos de regulación
similares en esta familia de transportadores SLC17. Otra
característica remarcable de VNUT es que reconoce a los
nucleótidos tanto en su forma libre como formando
complejos con cationes divalentes, como se pone de
manifiesto por el hecho de que el transporte de ATP no se
ve afectado por la presencia o ausencia de Mg2+ o Ca2+
(27, 101). A diferencia de VNUT, otros transportadores de
ATP, como el intercambiador ATP/ADP y el transportador
Mg-ATP/Pi mitocondriales, son capaces de distinguir entre
la forma libre y complejada del nucleótido (102, 103). Esto
indica que VNUT posee unas propiedades cinéticas muy
diferentes a las de otras proteínas que reconocen y unen
ATP. Dado que la concentración citosólica de Mg2+ libre
se encuentra aproximadamente en el rango milimolar, la
mayoría del ATP transportado por VNUT debe ser ATP-
Mg. Así en condiciones fisiológicas VNUT transporta
concentraciones aproximadamente equimolares de ATP y
Mg2+ a las vesículas secretoras. La supresión de la
expresión del gen VNUT reduce el contenido vesicular de
ATP y Mg2+ en una proporción similar. Estos resultados
sugieren que VNUT está implicado en la acumulación de
Mg2+ en los gránulos secretores (101). En el caso del Ca2+,
aunque el ATP también interacciona con este catión, la
concentración libre de Ca2+ en condiciones fisiológicas (en
el rango submicromolar) es muy inferior a la de Mg2+
(104, 105). Esto sugiere que el ATP citosólico formará
complejo mayoritariamente con el Mg2+, representando el
complejo Ca-ATP menos de un 0,1% del total de las
especies de ATP presentes en la célula. El transporte de
esta pequeña fracción de Ca-ATP a través de VNUT no
26 @Real Academia Nacional de Farmacia. Spain
Javier Gualix et al.
puede dar cuenta de la relativamente elevada
concentración de Ca2+ en el interior de las vesículas
Se ha descrito que los cuerpos cetónicos, como el
acetoacetato, compiten con el Cl- por su unión a los
VGLUTs y, por tanto, inhiben reversiblemente la actividad
de transporte de estas proteínas (38). La inhibición por
acetoacetato de estos transportadores lleva a una reducción
del glutamato almacenado en las vesículas y a una
disminución en la liberación exocitótica de este
neurotransmisor (38), sugiriendo estos resultados que la
neurotransmisión glutamatérgica se ve afectada por el
estado metabólico del organismo. Una regulación similar
por acetoacetato se observa también en otros miembros de
la familia SLC17, como el VNUT (38) (Figura 6), lo que
plantea la posibilidad de que la neurotransmisión
purinérgica pueda ser también controlada por los cuerpos
cetónicos. El efecto inhibitorio del acetoacetato sobre el
VNUT se previene completamente por la incubación con
una elevada concentración (100 mM) de Cl- (38). El
glioxilato, un metabolito de la glicina, se ha descrito
recientemente como un inhibidor selectivo de VNUT
(Figura 6). Este compuesto inhibe tanto a VNUT como a
VGLUT2, pero la concentración de glioxilato requerida
para el 50% de inhibición es de 620 µM, en el caso de
VGLUT2, mientras que para VNUT esta concentración es
de tan solo 4,1 µM (9). El glioxilato también inhibe el
transportador vesicular de nucleótidos excitatorios, VEAT,
otro miembro de la familia SLC17, en una extensión
similar a VGLUT2, pero no ejerce ningún efecto sobre
VMAT, VGAT o VAChT (38). VNUT también es
inhibido selectivamente por el clodronato (Figura 6). Este
bifosfonato actúa como un potente modulador alostérico
que se une al sitio de regulación por Cl- (106). Inhibidores
de la liberación de ATP, como la glibenclamida, el ácido
araquidónico, el ácido 18 a-glicirretínico, el ácido
flufenámico y el A438079, también inhiben a VNUT
(107).