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The nucleotide vesicular transporter (VNUT). Relevance in neural and neuroendocrine tissues. New pharmacological perspectives
entre sí a través de isomerizaciones lentas inducidas por el (100). El transporte de los diadenosina polifosfato a
sustrato. Las enzimas con este comportamiento cinético se vesículas secretoras, además de regular la accesibilidad de
denominan histeréticas o mnemónicas (98). En lo que se estos compuestos al espacio extracelular, podría ser
refiere a los transportadores, se ha descrito un también un mecanismo para finalizar sus acciones
comportamiento mnemónico en el caso del transportador citosólicas, lo que incrementa la relevancia fisiológica de
equilibrativo de adenosina presente en la membrana este proceso de transporte.
plasmática de las células cromafines (99). La alta
cooperatividad observada en el transporte de L-adenosina, 2.4. Identificación del transportador vesicular de
con un coeficiente de Hill próximo a 5, solo podía ser nucleótidos, VNUT. Propiedades bioquímicas.
explicada por la existencia de una forma multimérica del
transportador, mínimo dimérica, con transiciones lentas La exploración de la base de datos del genoma humano
entre distintos estados conformacionales de la proteína. El permitió identificar un nuevo gen SLC17 (27). Este gen,
comportamiento cinético del transportador de nucleótidos SLC17A9, codifica una proteína de 430 aminoácidos con
de los gránulos cromafines ha sido explicado utilizando un 12 hélices transmembrana. El análisis por Northern blot
modelo basado en el del transportador de adenosina (88). reveló que el gen SLC17A9 se expresa en varios órganos
Sin embargo, se requiere un mayor grado de complejidad pero es especialmente abundante en el cerebro, la glándula
teniendo en cuenta la elevada cooperatividad, que puede adrenal y la glándula tiroidea (27). Además, en la glándula
alcanzar valores de número de Hill iguales a 6. Este hecho adrenal, la proteína SLC17A9 es expresada
implica también la existencia de una forma dimérica del específicamente en la médula y está asociada con los
transportador, como requerimiento mínimo. Este modelo gránulos cromafines, como se reveló por ensayos de
mnemónico para el transportador de nucleótidos de los inmunohistoquímica, microscopía inmunoelectrónica y
gránulos cromafines ha sido confirmado mediante el uso Western blot (27). Estos datos son consistentes con la
de la técnica de citometría de flujo (87). Esta técnica ha hipótesis de que SLC17A9 codifica el transportador de
sido adaptada al estudio del transporte vesicular mediante nucleótidos de los gránulos.
la medida del incremento en la fluorescencia asociada a los
La proteína SLC17A9 humana fue expresada,
gránulos, debido a la internalización de los e-nucleótidos purificada e incorporada en liposomas. Para ahuyentar al
en estas vesículas. El análisis por citometría de flujo del “demonio del transporte de ATP” se omitió la H+-ATPasa
en los liposomas y se generó un ?? (positivo en el
transporte de e-ATP a los gránulos cromafines mostró interior), mediante la difusión de K+ a los liposomas por la
también una compleja curva de saturación no hiperbólica adición de valinomicina, con el fin de proporcionar la
(87), indicando que el peculiar comportamiento cinético fuerza impulsora del transporte. Como se esperaba, la
descrito anteriormente no es debido a un artefacto proteína SLC17A9 transporta activamente ATP a expensas
experimental, sino que es una propiedad intrínseca del
de ?? pero no de ?pH. Esta proteína transporta varios
transportador granular. Por otro lado, el transporte de e- nucleótidos, siendo el orden de eficacia ATP > UTP >
ATP a vesículas sinápticas de cerebro muestra también una GTP > ITP, ADP >> AMP. La adenosina no es
compleja cinética no hiperbólica con dos etapas (96). Este transportada por la proteína SLC17A9, mientras que el
comportamiento cinético puede ser explicado basándose en Ap3A es un buen sustrato del transporte. La selectividad de
un modelo mnemónico similar al descrito para el sustrato de la proteína SLC17A9 coincide con el contenido
transporte de nucleótidos a los gránulos cromafines. de nucleótidos de los orgánulos que almacenan ATP (27).
Además, SLC17A9 no transporta sustratos de otros
Respecto a la relevancia fisiológica que este miembros de la familia SLC17 como el glutamato, el
mecanismo pueda tener, la existencia de este fenómeno aspartato o el ácido hipúrico, lo que apoya que la proteína
mnemónico produce como resultado un mayor control de SLC17A9 sea un transportador que específicamente
la capacidad de transporte por variaciones en la reconoce un rango de nucleótidos como sustratos de
concentración de sustrato. Esta fina regulación de la transporte. El transporte mediado por SLC17A9 fue
actividad del transportador es esencial en el caso de un inhibido por DIDS y Evans blue (27) (Figura 6). El
metabolito, como es el ATP, de tanta importancia en el atractilósido es también un inhibidor parcial pero solo
metabolismo celular, y cuyos niveles citosólicos deben cuando el Mg2+ está presente en el medio de ensayo. Estas
estar bajo estricto control para asegurar el correcto características son similares, si no idénticas, a las
funcionamiento de la célula. El complejo comportamiento observadas en el transporte de nucleótidos a los gránulos
mnemónico del transportador vesicular permitiría el cromafines y las vesículas sinápticas. Por otra parte, la
transporte de ATP al interior de las vesículas de manera proteína SLC17A9 se expresa de manera endógena en
altamente regulada (8). En el caso de los diadenosina células de feocromocitoma PC12. La supresión de la
polifosfato, no se conoce completamente su función en el expresión del gen SLC17A9 mediante el uso de ARN de
interior de la célula. Sin embargo, sus niveles citosólicos interferencia (ARNi) resulta en una disminución del
se encuentran incrementados en células con una elevada almacenamiento y la liberación vesicular de ATP en estas
actividad proliferativa o bajo ciertas condiciones, como el células PC12. En conjunto, todos estos resultados
estrés ambiental, pudiendo estas sustancias actuar como demuestran que SLC17A9 codifica un transportador
señales en los procesos de decisión celular que conducen a vesicular de nucleótidos (VNUT) (27).
proliferación, quiescencia, diferenciación o apoptosis
@Real Academia Nacional de Farmacia. Spain 25
