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Javier Gualix et al.

metodológica utilizada para caracterizar el transporte de su lugar, se obtienen complejas curvas de saturación, no

nucleótidos a los gránulos cromafines, basada en el uso de hiperbólicas, con varias etapas (8). La compleja

eteno-derivados como sustratos del trasporte (8, 88), fue dependencia de la velocidad de transporte con la

aplicada al estudio del transportador presente en vesículas concentración extragranular de los e-nucleótidos, hizo
sinápticas aisladas de cerebro de rata (96). Este necesario interpretar las curvas de saturación como la
transportador mostró muchas similitudes con el descrito en superposición de varias cinéticas sigmoides Estos datos
los gránulos cromafines. Entre ellas, la inhibición del experimentales, por tanto, fueron procesados mediante la
transporte por atractilósido y DIDS, si bien el inhibidor ecuación resultante de la suma de varias cinéticas tipo Hill

más efectivo del transporte de e-ATP a las vesículas (8):
sinápticas fue el colorante azul de Evans (Evans blue) (96),
un compuesto previamente descrito como un potente ?V = Vmax · S n
inhibidor del transportador vesicular de glutamato (97). Kn +Sn

Además, el transporte de e-ATP a las vesículas es inhibido Los parámetros cinéticos de cada una de las curvas
por los diadenosina polifosfato Ap3A, Ap4A, y Ap5A, lo
que sugiere que estos compuestos pudieran ser también sigmoidales cuya adición da cuenta de las curvas de
sustratos del transportador, como se ha demostrado en el
modelo de los gránulos cromafines (88). Finalmente, la saturación experimentales para el transporte de los e-
nucleótidos a los gránulos cromafines, aparecen recogidos
presencia de e-ATP en el interior de las vesículas tras el
transporte de e-ADP (96), indica la existencia de en la Tabla 1.
actividades enzimáticas intravesiculares de intercambio de
grupos fosfato que equilibran los niveles de los distintos También el transporte de los diadenosina polifosfato a
nucleótidos presentes en estos orgánulos, como se ha los gránulos cromafines muestra complejas curvas de
descrito también para los gránulos cromafines (8, 80, 82, saturación no hiperbólicas, cuando se estudia en un amplio
83). rango de concentraciones de sustrato (88). La forma de
estas curvas es similar a la observada para el transporte de

e-ATP, e-ADP y e-AMP, realizándose el análisis de los
datos experimentales siguiendo el mismo criterio que para

2.3. Características cinéticas del transportador vesicular de estos sustratos. Los parámetros cinéticos de las curvas
nucleótidos. Comportamiento mnemónico sigmoides que son los constituyentes de las curvas de
saturación experimentales para el transporte de los
Cuando se analiza en un amplio rango de diadenosina polifosfato, aparecen también recogidos en la
concentraciones de sustrato, el transporte de los eteno- Tabla 1.

nucleótidos (e-ATP, e-ADP y e-AMP) a los gránulos
cromafines no sigue una cinética de Michaelis-Menten. En

Tabla 1. Parámetros cinéticos del transporte de nucleótidos y dinucleótidos a gránulos cromafines

Curvas e-ATP e-ADP e-AMP e-Ap4A [3H]Ap5A

K (µM) 1 250 150 200 16 16
125
2 1000 900 1200 75 545

3 3000 3600 3200 —

Vmax (pmol·min-1·mg prot.-1) 1 20 25 10 18 15
2 40 35 40 13 8

3 190 300 55 — 102

nH 13222 2

24434 4

3 5 5 5— 6

Parámetros cinéticos de las curvas cuya adición da cuenta de las curvas de saturación experimentales para el transporte de
nucleótidos y dinucleótidos a los gránulos cromafines. K, Vmax y nH representan, respectivamente, los valores de S0,5,
velocidad máxima parcial y número de Hill, para cada una de las curvas. Adaptado y modificado de (8, 88).

Estas complejas curvas cinéticas no pueden explicarse por las curvas de saturación. En enzimas alostéricas, la
por la existencia de diferentes transportadores de aparición de varias mesetas intermedias en las
nucleótidos en los gránulos cromafines. La superposición representaciones de V frente a [S]0 ha sido explicada por la
de distintos transportadores con sus respectivas afinidades presencia de diferentes conformaciones del enzima, con
es incompatible con la cooperatividad positiva mostrada distintas propiedades cinéticas, que se interconvierten

24 @Real Academia Nacional de Farmacia. Spain