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Alicia Rodríguez Gascón, M.ª Ángeles Solinís Aspiazu, Ana del Pozo Rodríguez
A continuación se presentan nuestras aportaciones que
demuestran la potencial aplicación de las SLNs para
terapia génica. Más específicamente, nos hemos centrado
en las enfermedades raras y en las enfermedades
infecciosas.
6.1. Enfermedades raras
6.1.a. Retinosquisis juvenil ligada al cromosoma X (XLRS)
La XLRS es una enfermedad degenerativa de la retina
central que tiene un modo de herencia recesivo afectando
casi exclusivamente a hombres, aunque también hay casos
aislados descritos en mujeres, con una prevalencia
estimada de 1/5.000 – 1/25.000 (55). Puede desarrollarse
desde edad muy temprana, pero lo más frecuente es
detectarla en pacientes entre 5 y 10 años porque los
pacientes de esas edades encuentran dificultades en la
lectura. Los principales síntomas que se experimentan
desde la infancia son la dificultad para ver en detalle y la
disminución de la visión central, que progresa muy
lentamente. A veces se produce disminución brusca de la
visión debido a hemorragias o desprendimiento de retina.
En el centro de la retina se observa una cavidad quística
que puede desarrollarse en la fóvea. También puede
presentarse en la retina periférica. Los quistes presentan un
patrón estrellado y estrías radiales que se han comparado
con los radios de una rueda de bicicleta; pueden coalescer
para formar una gran cavidad quística central, lo que
conduce a una rápida pérdida de visión. El gen responsable
de la retinosquisis (RS1) codifica una proteína de 224
aminoácidos, la retinosquisina (56,57). Esta proteína se
expresa muy abundantemente en los fotorreceptores (retina
externa), pero la enfermedad típicamente afecta a las capas
retinianas más internas que contienen células ganglionares,
incluida la capa de fibras nerviosas. Tras la síntesis y
secreción de retinosquisina por los fotorreceptores, la
proteína alcanza la superficie de las células retinianas y es
la responsable de la interacción/adhesión entre
fotorreceptores, células bipolares y células de Müller,
contribuyendo al mantenimiento de la integridad de la
retina. El espectro de mutaciones en el gen RS1 es amplio,
habiendo mutaciones que truncan la proteína (deleciones
pequeñas, inserciones y splicesite) o mutaciones missense
que suelen encontrarse en el dominio discoidin (importante
para la adhesión entre células). Al fallar esta proteína, falla eficacia de un vector no viral para transfectar la retina de
la adhesión entre las células, lo que permite que se formen
los espacios quísticos que dan nombre a la enfermedad
(58).
416 @Real Academia Nacional de Farmacia. Spain
La terapia génica ha sido propuesta como una potencial
herramienta para el tratamiento de diferentes enfermedades
oculares, incluyendo las enfermedades degenerativas de la
retina (59,60). Por ello, para conocer la potencial utilidad
de nuestros vectores en el tratamiento de la XLRS,
preparamos los vectores a base de SLNs con el plásmido
pCEP4-RS1, y evaluamos su capacidad para inducir la
producción de retinosquisina en células ARPE-19.
Comprobamos que tras el tratamiento, las células eran
capaces de expresar el gen RS1 y sintetizar la proteína;
además detectamos una mayor producción de
retinosquisina cuando el vector incluía, además de las
SLNs, protamina y dextrano (61) y más aún cuando se
sustituía el dextrano por el AH (33). Posteriormente
demostramos que ese vector, preparado con un gen
marcador (pCMS-EGFP), que codifica para la proteína
verde fluorescente, era capaz de transfectar la córnea tras
su administración tópica a ratas, y la retina tras la
administración intravítrea y subrretiniana, también en
ratas. Además, observamos que en el caso de la retina, el
tipo de células transfectadas dependía de la vía de
administración. Así, la administración intravítrea daba
lugar a una mayor transfección de células ganglionares,
mientras que se transfectaban más fotorreceptores y
células del epitelio pigmentario cuando el vector se
administraba por vía subrretiniana (61).
En una fase posterior, administramos los vectores a
ratones transgénicos deficientes en el gen RS1, por vía
subrretiniana y por vía intravítrea. A las dos semanas de la
administración, pudimos detectar la retinosquisina
producida como consecuencia del proceso de transfección
en las diferentes capas de la retina, y cuando los vectores
se administraron por vía subrretiniana, pudimos detectar la
retinosquisina también a los dos meses. El análisis
estructural confirmó la recuperación parcial de la
estructura de la retina, que estaba significativamente
dañada en los animales como consecuencia de la
enfermedad. En la figura 9 se recoge la expresión de
retinosquisina en la retina de los animales, e imágenes de
las retinas tras la tinción tricrómica de Masson. Puede
observarse la recuperación de la integridad de las retinas
de los animales tratados (33, 62).
Estos trabajos han demostrado por primera vez la
animales deficientes en el gen RS1, producir retinosquisina
y mejorar la integridad de la retina. Hasta nuestro
conocimiento, son los estudios más avanzados que
muestran el potencial real de las SLNs en terapia génica.