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expresan la IRB (19). Por otro lado, se ha descrito que la Almudena Gómez-Hernández et al.
insulina induce la vía de señalización PI3K/Akt y la
translocación de Glut-4 del citosol a la membrana IRLoxP+/+ VSMCs e IRA VSMCs (Figura 2E). Y
plasmática (23). Por ello, nos planteamos en este trabajo comprobamos que aunque los niveles totales de Glut-4
analizar el papel diferencial de las dos isoformas del IR en eran muy similares en todas las líneas celulares estudiadas,
la captación de glucosa y se observó que la insulina la insulina inducía translocación de Glut-4 desde el citosol
inducía captación de glucosa dosis dependiente en las a la membrana plasmática en IRA VSMCs, pero no en IRB
VSMCs (Figura 2F).

Figura 2. Caracterización, señalización de insulina y captación de glucosea de las VSMCs. (A) Análisis por Western blot de AgT,
p53, a-SMA y ß-actina en el cultivo primario y las líneas celulares: WT and IRLoxP+/+. (B) (Panel superior) Análisis por Western blot de
IRß en IRLoxP+/+, IR-/-, IRA e IRB VSMCs. (Panel inferior) RT-PCR de las isoformas del IR isoforms en todas las líneas celulares

estudiadas. (C) Análisis por Western blot de la fosforilación de AKT, p70S6K y ERK en VSMCs en respuesta a insulina 10nM. (D)

Análisis comparativo por Western blot de la fosforilación de AKT, p70S6K y ERK en VSMCs en respuesta a insulina, IGF-1 o IGF-2

10nM. (E) Captación de glucosa dependiente de insulina en VSMCs. (F) Análisis por Western blot de Glut-4 en la membrana plasmática

y en el citosol de VSMCs estimuladas con 100 nM de insulina durante 30 min. Los experimentos fueron realizados al menos 5 veces.
Cultivo primario (PC); línea celular (CL); VSMC con IR (WT and IRLoxP+/+); VSMC sin IR (IR-/-); VSMC sólo con IRA (IRA); VSMC

sólo con IRB (IRB); Inmunoprecipitación (IP) y Western blot (WB). *p<0.05 vs. Control.

A continuación, como en los modelos in vivo habíamos inducen un aumento significativo de la expresión a nivel
visto que el patrón de expresión de las isoformas del IR o del mRNA y de los niveles de proteína de la IRA sin
IGF-1R en la arteria aorta de animales control con respecto modificar la expresión de la IRB en las VSMCs (Figura
a los grupos que poseen alteraciones vasculares puede
modificarse, pensamos que ciertos estímulos implicados en 3A, B, D y E). Además, tanto el IGF-2 como el TNF-a
dichas alteraciones podrían también in vitro modificar la serían capaces también de aumentar significativamente la
expresión de estos receptores. En este sentido, observamos expresión y los niveles de proteína del IGF-1R en las
tanto por qRT-PCR como por Western blot, que la VSMCs (Figura 3C y F).

insulina, IGF-2, TNF-a y otros estímulos aterogénicos, A continuación, evaluamos uno de los principales
como Ang II, ET-1 o el análogo del TXA2 (U46619) objetivos del presente trabajo que es el papel de estos
receptores en la proliferación de las VSMCs. Para ello,

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