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utilizando un kit de ELISA BrdU. La incubación con la Almudena Gómez-Hernández et al.
solución de BrdU marcado fue de 18 h.
23,7% y una estenosis del 32,8% (datos no mostrados).
2.9. Ensayo de herida Además, presentan un aumento significativo del infiltrado
de macrófagos, del número de VSMCs y de la tinción
La migración de las VSMCs fue evaluada mediante un frente a PCNA en los arcos aórticos. También se observó
ensayo de reparación o cierre de herida. Para este ensayo, una aumento significativo de la expresión del mRNA de
las células se dejaron crecer hasta confluencia en DMEM
suplementado con 10% de FBS. Tras 18 horas sin suero, se ET-1, ICAM-1, MCP-1, TNF-a y PAI-1 así como de IRA
realizó una “herida” en la parte central de la placa de (Figure 1A), sin cambios en la IRB, en la arteria aorta de
cultivo usando una punta de pipeta estéril y se lavaron las ratones ApoE-/-.
células varias veces con PBS 1X para asegurar la
eliminación de todas las células levantadas y/o muertas. El segundo de los modelos que se ha empleado ha sido
Las células, a excepción de las células control, se el ratón BATIRKO de 52 semanas que muestra resistencia
estimularon con insulina (10 nM), IGF-1 (10 nM), IGF-2 vascular a la insulina y disfunción vascular (18). Estos
(10 nM), o TNF-a (10 ng/ml) y se incubaron durante 24 ratones tienen una severa lipoatrofia marrón, obesidad,
horas. La migración celular fue monitorizada en tres hipoinsulinemia, moderada hiperglucemia en el ayuno,
puntos de referencia seleccionados por visualización intolerancia a la glucosa sin resistencia global a la insulina
microscópica directa utilizando un microscopio invertido debido a un defecto en la secreción de la insulina (18).
(Nikon Eclipse TE300); mediante una cámara digital Previamente se había demostrado que en la aorta del ratón
acoplada al microscopio (Nikon Digital Sight DSU2), se BATIRKO de 52 semanas había un aumento significativo
tomaron fotografías con un objetivo 10X a tiempo 0
(momento en que realizó la herida) y a las 6, 12 y 24 horas de la expresión de ET-1, ICAM-1, MCP-1, TNF-a o PAI-
de incubación. Se empleó el programa TScratch para llevar 1 así como un aumento significativo de la expresión de la
a cabo la cuantificación de las tasas de cierre de herida, IRA (Figura 1B). Además, se observó también una
expresando los resultados como porcentaje de cierre a las correlación significativa y positiva entre la expresión de la
6, 12 o 24 horas respecto al tiempo 0.
IRA y ET-1, o ICAM-1, o MCP-1, o TNF-a o PAI-1 tanto
2.10. Análisis estadístico en la arteria aorta de ratones ApoE-/- como de ratones
BATIRKO (datos no mostrados).
Todos los valores se expresaron como media ± SEM.
Los datos se analizaron utilizando un ANOVA seguido de Además de observar un aumento significativo de la
un test de Bonferroni (Graph Pad Prism 5.0, La Jolla, CA, expresión de la isoforma A del IR en la aorta de los ratones
USA). Se consideró estadísticamente significativo cuando ApoE-/- y BATIRKO de 52 semanas, se obtuvo un
p<0.05. aumento significativo de la expresión de IGF-1R y una
mayor formación de receptores híbridos IRA/IGF-1R.
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Todo ello contribuyendo a la proliferación y migración de
las VSMCs implicadas en las fases iniciales del
3.1. Implicación de la IRA, IGF-1R y los receptores crecimiento de la placa. Otros autores han descrito
híbridos IRA/IGF-1R en la aterosclerosis temprana previamente que hay un aumento significativo del IGF-1R
en las placas ateroscleróticas de un modelo experimental
Uno de los principales objetivos de este trabajo es en conejos (19). Sin embargo, los niveles de IGF-1 e IGF-
valorar si el perfil de expresión de las isoformas del IR 1R están disminuidos en placas ateroscleróticas avanzadas
podría modificarse en el proceso aterosclerótico al igual y podrían contribuir a la apoptosis de las VSMCs y
que ocurre en otras situaciones patológicas como en la favorecer la ruptura de la placa aterosclerótica (20, 21).
hiperplasia pancreática o en procesos tumorales. Para ello,
empleamos dos modelos animales que presentan distinto Un aumento significativo en la formación de receptores
grado de daño vascular. El primero de ellos fue el ratón híbridos IRA/IGF-1R en la arteria aorta de ApoE-/- y
ApoE-/- como modelo de hipercolesterolemia que BATIRKO podría contribuir al desarrollo de la resistencia
desarrolla aterosclerosis de forma espontánea o sometido a a la insulina vascular. La regulación de la expresión del
dieta grasa. El ratón ApoE-/- presentó un aumento IGF-1R podría impactar sobre la sensibilidad a la insulina.
significativo de los niveles de colesterol y de los En este sentido, la disminución de la expresión de IGF-1R
triglicéridos sin alteraciones en el metabolismo de la podría incrementar la fracción de receptores de insulina
glucosa. El área de lesión en los arcos aórticos era del organizados en holoreceptores que podría conducir a
48,9%, la acumulación lipídica en los arcos aórticos del aumentar la señalización de insulina y las propiedades
anti-inflamatorias de la misma (22).
132 @Real Academia Nacional de Farmacia. Spain
