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Detección
de
alérgenos
de
cacahuete…

Figura
2.-­-
Etapa
de
hibridación.
(A)
Hibridación
homogénea
o
en
disolución
e
(B)
hibridación

heterogénea
o
en
superficie

Concluida
la
etapa
de
hibridación,
se
procedió
al
marcaje
enzimático,

añadiendo
15
µL
de
una
disolución
del
conjugado
fosfatasa
alcalina-­-estreptavidina

(1,075·10-­-3
g/L)
sobre
la
monocapa.
La
sonda
indicadora
biotinilada
se
unió
al

conjugado
enzimático
por
el
enlace
de
alta
afinidad
estreptavidina-­-biotina.

Finalmente,
se
llevó
a
cabo
la
detección
electroquímica
para
lo
cual
se
añadió,
a
la

superficie
electródica,
40
µL
de
una
disolución
de
1-­-naftilfosfato
4
mM
en

disolución
tampón
de
medida.
El
enzima
ALP
cataliza
la
conversión
de
1-­-
naftilfosfato
a
1-­-naftol,
producto
electroactivo
de
estructura
plana
heterocíclica,

cuya
oxidación
se
midió
mediante
voltamperometría
de
pulso
diferencial
(DPV),

realizando
un
barrido
de
0
a
+0,6
V.

2.3.2.
Diseño
de
experimentos

Se
realizó
un
diseño
factorial
completo
32,
con
2
variables
(concentraciones

de
sonda
de
captura
y
MCH)
medidas
a
3
niveles.
Los
resultados
se
analizaron
con

el
software
estadístico
Statgraphics®
Centurion,
versión
XVI
(19).
El
modelo
que

puede
soportar
el
diseño
utilizado
es
la
función
polinómica
de
segundo
grado:

Y = ß0 + ß1X1 + ß2X2 + ß11X12 + ß22X22 + ß12X1X2

donde
los
coeficientes
ß
representan
los
efectos
lineales
y
cuadráticos
de
las

variables
X1
(concentración
de
sonda
de
captura,
M)
y
X2
(concentración
de
MCH,

M)
así
como
su
interacción.
La
variable
dependiente
o
variable
respuesta
es
la

respuesta
electroquímica
medida
por
el
genosensor
(intensidad
de
corriente,
A).

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