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M.
Sánchez-­-Paniagua
López
&
al.

La
monocapa
mixta
(SAM),
consta
de
una
sonda
de
ADN
tiolada
y
como

agente
bloqueante,
mercaptohexanol
(MCH).
La
inmovilización
de
la
sonda
se
llevó

a
cabo
mediante
un
proceso
de
quimisorción,
unión
colavente
entre
los
grupos
SH

de
la
sonda
con
el
Au
del
electrodo.
El
MCH
se
intercala
entre
las
hebras
de
ADN

quimisorbidas,
controlando
su
disposición
sobre
el
electrodo
e
impidiendo
las

adsorciones
inespecíficas
de
la
sonda.
Las
cadenas
de
ADN
se
orientan
paralelas

entre
sí
y
perpendiculares
a
la
superficie
electródica
(Figura
1),
y
así,
favorecen
el

proceso
de
hibridación
(17,
18).

Figura
1.-­-
Formación
de
una
monocapa
autoensamblada
mixta
organizada
sobre
electrodos
de
oro

serigrafiado.

Para
la
inmovilización
de
la
sonda
de
captura
se
depositaron
15
µL
de
una

disolución
de
la
sonda
en
el
tampón
de
inmovilización,
manteniéndose
en

atmósfera
cerrada
y
saturada
con
agua
durante
19
horas.
La
monocapa
mixta
se

completó
adicionando
10
µL
de
MCH
en
disolución
tampón
de
inmovilización;

dejándose
15
min.
Las
concentraciones
de
sonda
de
captura
y
MCH
cambian
y
se

especifican
en
cada
una
de
las
experiencias.

El
genosensor
propuesto
se
basa
en
un
formato
tipo
sándwich
que
requiere

la
hibridación
completa
del
analito
con
dos
sondas
diferentes.
Una
parte
de
la

secuencia
del
analito
hibrida
con
una
sonda
indicadora
biotinilada
(hibridación

homogénea,
Figura
2.A)
y
el
resto
de
analito
hibrida
con
la
sonda
de
captura

inmovilizada
(hibridación
heterogénea,
Figura
2.B).
La
hibridación
homogénea
se

llevó
a
cabo
mezclando
el
analito
y
la
sonda
indicadora
en
la
disolución
tampón
de

hibridación,
con
una
concentración
de
sonda
indicadora
final
de
2
µM.
La
mezcla
se

calentó
a
98ºC
para
romper
las
estructuras
secundarias
de
ambas
sondas,
se

sumergió
en
hielo
y
se
dejó
reposar
a
temperatura
ambiente
para
favorecer
la

hibridación.
Posteriormente,
se
depositaron
15
µL
de
esta
disolución
sobre
el

electrodo
modificado,
dejando
que
transcurriese
la
hibridación
heterogénea

durante
2
horas
a
temperatura
ambiente.

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