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Detección
de
alérgenos
de
cacahuete…

utilizados
sin
purificación
previa.
El
etanol
y
el
ácido
sulfúrico
fueron
adquiridos

en
Panreac
(España).

Las
disoluciones
tampón
utilizadas
en
la
preparación
del
sensor
fueron:
i)

disolución
tampón
de
inmovilización
e
hibridación
formada
por
2×SSPE
pH
7,4;
ii)

disolución
tampón
de
bloqueo
consistente
en
5×SSPE
pH
7,4
+
5%
BSA
+
0,1%

Tween
20;
y
iii)
disolución
tampón
de
medida
compuesta
por
0,5
M
Tris-­-HCl
pH
9,8

+
1
mM
de
MgCl2
+
0,1
M
de
KCl.

Las
secuencias
de
oligonucleótidos
utilizadas
fueron
suministradas
por

Sigma-­-Life
Science
(Reino
Unido).
Dichas
disoluciones
se
reconstituyeron
en
agua

Milli-­-Q
y
se
almacenaron
a
-­-20ºC
hasta
su
uso.

2.2.
Instrumentación

Las
medidas
electroquímicas
se
realizaron
en
un
potenciostato
Autolab

PGSTAT
12,
controlado
por
el
software
GPES
4.9005
(EcoChemie
B.V,
Holanda).
Se

utilizaron
electrodos
serigrafiados
de
oro
(referencia
220BT;
DropSens,
España)

que
constan
de
una
configuración
de
tres
electrodos
impresos
en
una
lámina
de

alúmina,
un
electrodo
de
trabajo
(diámetro
4
mm)
y
un
electrodo
auxiliar,
ambos

de
oro,
y
un
electrodo
de
pseudo-­-referencia
de
plata.
La
celda
electroquímica
está

limitada
por
un
anillo
formado
por
un
polímero
aislante
que
rodea
a
los
tres

electrodos
y
tiene
un
volumen
máximo
de
50
µL.
Todos
los
experimentos
se

llevaron
a
cabo
a
temperatura
ambiente
utilizándose
un
electrodo
para
cada

medida.
Las
medidas
de
pH
se
realizaron
en
un
pH-­-metro
Crison
micropH
2001

(España).
Para
la
cuantificación
del
ADN
se
utilizó
un
espectrofotómetro
UV-­-visible

Cary
300
Bio
(Agilent
Tehcnologies,
Estados
Unidos).

2.3.
Procedimiento
experimental

2.3.1.
Diseño
del
sensor
de
ADN

Como
todos
los
biosensores,
los
genosensores
o
sensores
de
ADN
combinan

un
elemento
de
reconocimiento
biológico,
que
en
este
caso
es
una
secuencia
de

oligonucleótidos
denominada
sonda,
con
un
transductor
encargado
de
la
medida

de
la
reacción
de
hibridación
entre
la
sonda
y
el
analito.
La
sonda
utilizada
será

complementaria
a
la
secuencia
de
ADN
de
interés
(analito)
y
formarán
un
híbrido

de
Watson-­-Crick
con
extrema
selectividad
incluso
en
presencia
de
sondas
de

oligonucleótidos
no
complementarias.

La
preparación
del
sensor
comienza
por
la
formación
de
una
monocapa

autoensamblada
(SAM)
sobre
la
superficie
del
electrodo
de
oro.
Antes
de
su

utilización,
los
electrodos
serigrafiados
de
oro
se
sometieron
a
un
proceso
de

limpieza
que
consistió
en
lavado
con
etanol
y
agua
Milli-­-Q
seguido
de
un

pretratamiento
electroquímico
de
25
barridos
cíclicos
entre
0
y
+1,6V,
a
100
mV/s,

en
H2SO4
0,1
M,
para
eliminar
los
residuos
del
proceso
de
fabricación,
y
así
mejorar

la
sensibilidad
y
reproducibilidad
de
los
resultados
(16).

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