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VOL. 74 (3), 325-344, 2008 PAPEL DE LA PROTEÍNA RIBOSOMAL S6K1...

Análisis estadístico

Las representaciones gráficas se elaboraron utilizando los valores
medios ± los errores estándar de las medias (SEM). Las diferencias
significativas se determinaron mediante el test t de student.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Caracterización de las líneas celulares S6K1+/+ y S6K1–/–

Para realizar este estudio, hemos generado líneas celulares a
partir del hígado de ratones S6K1+/+ (genotipo salvaje) y S6K1–/–
(deficientes en S6K1) de 3 a 5 días de vida post-natal. Estos ratones
proceden de una colonia que se encuentra en el «Genome Research
Institute» (University of Cincinnati, U.S.A.), del laboratorio de Sara
Kozma y George Thomas, con los que hemos realizado una colabo-
ración. En primer lugar, se inmortalizaron los hepatocitos primarios
obtenidos en cultivo mediante una infección con el vector retroviral
que expresa la proteína antígeno T largo del virus SV40 (AgT) (11).
Los hepatocitos infectados se seleccionaron en medio suplementa-
do con puromicina (0,5 µg/ml) y se obtuvieron diversos clones a
partir de los hepatocitos supervivientes. A partir de este momento
trabajamos con dos clones de células S6K1+/+ y cuatro clones de
células S6K1–/–.

A continuación, caracterizamos los clones seleccionados mediante
el análisis de la expresión endógena de proteínas marcadoras de los
hepatocitos como albúmina (ALB: proteína plasmática secretada
exclusivamente por estas células), citoqueratina 18 (CK18: proteína de
citoesqueleto marcadora de células epiteliales parenquimatosas) y
carbamoil fosfato sintasa (CPS: marcador del ciclo de la urea) por
inmunofluorescencia y microscopía confocal (Figura 1A). Por otro
lado, comprobamos que las células no emiten fluorescencia cuando se
ponen en contacto con el anticuerpo anti-vimentina y se visualizan en
el microscopio confocal. Esto indica que no hay contaminación de
fibroblastos ya que la vimentina es un marcador del citoesqueleto que
no se expresa en células parenquimáticas pero es un marcador positi-
vo para células mesenquimales.

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