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JOSÉ-PÍO BELTRÁN Y COLS. ANAL. REAL ACAD. NAC. FARM.
G y el cocultivo se continuó durante 2 días a 22ºC en condiciones de
luz continua La selección se realizó sobre medio DKW (Duchefa)
conteniendo 20 g l-1 sacarosa, 1 mg l-1 BAP, 0.01 mg l-1 IBA, 0.01 mg
l-1 GA3, 25 mg l-1 kanamicina y 500 mg l-1 carbenicilina. Las plántulas
regeneradas se transfirieron luego a medio MS (24) con 250 mg l-1
carbenicilina y 25 mg l-1 kanamicina para regenerar y enraizar. Los
transformantes primarios (T1) fueron transferidos a pequeñas mace-
tas y aclimatados en el invernadero. Tras 2 semanas, las plantas se
colocaron en macetas de 1.5 l con sustrato Floraton-3. A las 4 sema-
nas se añadió fertilizante (PlantoSan Compact, Aglukon). El fotope-
riodo fue de 16h de luz y 8h de oscuridad. Para condiciones de día
largo la luz se suplementó con lámparas fluorescentes (Son-T Agro
400).
9. Transformación de Solanum lycopersicon (cv. Micro-Tom)
9. y análisis de las plantas transgénicas.
La transformación genética de plantas de Solanum lycopersicon
(cv. Micro-Tom) se realizó utilizando el protocolo optimizado descri-
to por Ellul et al. (7) que utiliza como material de partida cotiledones
procedentes de plántulas germinadas in vitro. Los brotes transgéni-
cos, una vez enraizados, desarrollaron estructuras vegetati-
vas que nos permitieron obtener nuevas plantas mediante propaga-
ción clonal. utilizando estas estructuras vegetativas se realizaron los
análisis moleculares y el análisis de ploidía de los transformantes pri-
marios.
El nivel de ploidía se analizó mediante citometría de flujo, utili-
zando para el aislamiento de núcleos hojas procedentes de transfor-
mantes primarios (T1) cultivados en medio de enraizamiento libre de
antibiótico. El tejido de aproximadamente 1cm2 se colocó en una
placa Petri de 50 mm. de diámetro, a la que se añadió 200 µl de tam-
pón de extracción de núcleos (Partec) y se troceó con una cuchilla.
Una vez troceado el tejido, se pasó la suspensión resultante a través
de una malla de nylon de 50 µl (Nybolt), y se añadieron 800 µl de una
solución colorante que contenía 1mg/l de DAPI (4,6-diamino-2.phen-
yl-indole), consiguiendo así la tinción fluorescente del DNA. El DNA
de los núcleos aislados se midió utilizando un citómetro de flujo
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