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VOL. 73 (4), 1237-1164, 2007 ANDROESTERILIDAD INDUCIDA MEDIANTE...

Partec PAS-II, provisto de una lámpara de mercurio. El resultado
aparece trazado sobre una escala semilogarítmica, en la que el histo-
grama que alcanza desde 2C a 32C se distribuye a lo largo del eje de
abscisas. Para calibrarlo se utilizó el pico 2C de núcleos de hojas
jóvenes de plántulas de tomate diploides cultivadas in vitro.

10. Análisis de los transgenes mediante reacción en cadena
10. de la polimerasa (PCR)

Para el análisis por PCR de las líneas transgénicas, se extrajo
DNA genómico siguiendo el método de Rogers y Bendich (26). La
presencia del transgén de la barnasa se detectó mediante PCR utili-
zando los cebadores: Pro3 (5´-TGCTCACAACATAACCTTCCTTG-3´;
nucleótidos –26 a –4 de la secuencia del promotor PsEND1, Gene
Bank número de acceso: AY324651) e Inhi3: (5´-CGCAGCCTTC-
CGCTTTCGC-3´; de la secuencia complementaria de gen barstar (nu-
cleótidos 374 a 355, Gene Bank número de acceso: X15545). Las
secuencias de DNA se analizaron siguiendo el método descrito por
Sanger et al. (29) en un secuenciador automático ABI PRISM 377
(Perkin Elmer).

RESULTADOS

1. PsEND1, un gen que se expresa específicamente en las
anteras del guisante.

En nuestro laboratorio, aislamos un clon de cDNA que contenía
la secuencia codificante completa de la proteína PsEND1, cuya ex-
presión es específica de anteras. El aislamiento de dicho cDNA fue
posible gracias a la secuenciación del extremo N-terminal de la pro-
teína PsEND1 que purificamos mediante cromatografía de afinidad
a partir de extractos de antera utilizando un anticuerpo monoclonal
obtenido por nosotros (3). Mediante experimentos de hibridación in
situ e inmunolocalizaciones sobre secciones de flores en desarrollo
comprobamos que la expresión de PsEND1 se circunscribe a la epi-
dermis, capa intermedia, endotecio y tejido conectivo (Figura 1A)
desde estadíos tempranos del desarrollo de las anteras hasta la de-

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