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RODRIGO EUGENIO DÍAZ VICIEDO AN. R. ACAD. NAC. FARM.

residuos fueron conservados a una temperatura de 2 a 8° C para su
posterior análisis cromatográfico: cromatografía en capa fina (TLC)
y cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Para el posterior
estudio fitoquímico y farmacológico se obtuvieron un extracto me-
tanólico y un extracto acuoso, ambos de las hojas de Helianthus
annuus L. mediante extracción Soxhlet.

Procesos de aislamiento y purificación

Del extracto obtenido a partir de 1 kg de cabezuelas sin semillas
(44 g) se eliminan los ácidos grasos realizando una saponificación
con 27,5 g de KOH, 200 mL de MeOH, 50 mL de benceno y 25 mL
de agua, en agitación a temperatura ambiente durante 48 horas,
calentando a reflujo durante dos horas más. El residuo obtenido se
diluye en agua hasta 40 mL aproximadamente. Esta solución se
neutraliza y acidifica con un exceso de ácido acético glacial hasta
alcanzar un pH ˜ 2, para posteriormente realizar una extracción con
éter etílico en embudo de decantación. Se elimina la fase acuosa.
La fase orgánica se lava con agua, se deseca con Na2SO4 anhidro y
se evapora a sequedad en rotavapor, obteniéndose un residuo de
39,1 g. Este residuo se trató con 384 mL de MeOH y 118 g de urea
durante una hora a reflujo, con el fin de eliminar como clathratos la
mayoría de los componentes de cadena lineal (hidrocarburos, alco-
holes y ácidos grasos) que interfieren en el proceso de aislamiento.
Transcurrido el reflujo, la solución se filtra y el filtrado se evapora
a sequedad para luego realizar nuevamente una extracción con éter
etílico en las mismas condiciones anteriores. La fase orgánica se lava
con agua, se deseca con Na2SO4 anhidro y se evapora a sequedad en
rotavapor, obteniéndose 21,4 g de un residuo. Este residuo fue cro-
matografiado en columna de sílica gel 60 (tamaño partícula 0,040-
0,063 mm, hcolumna = 34 cm, fcolumna = 6,5 cm), eluyendo por gradiente
fracciones de 200 mL aproximadamente. Se utilizaron los siguientes
eluyentes en las proporciones indicadas: hexano, hexano: acetato de
etilo 9:1, hexano: acetato de etilo 3:1 y hexano: acetato de etilo 1:1.

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