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VOL. 69 (1) , DEFICIENCIAS EN PIRUVATO QUINASA
EXON 3: Directa: 5’ GGTTGCCTCTCATGTTCTGGG 3’; Inversa: 5’GGAAGGTGGCCAEXON
EXON 4: Directa: 5’ CGAGGTCCTGGCCACCTTCC 3’; Inversa: 5’ GGCCGCCTTTCCGGCCCTG
3’
EXON 5: Directa: 5’ GCAGGGGCGGGTCCCGGACT 3’; Inversa: 5’ TGCCCAGCGCACG-
GATGTGG 3’
EXON 6: Directa: 5’ CAACTGTGCCCCGTCCTCA 3’; Inversa: 5’ GTGATGGGGAATAGCGA-
CAG 3’
EXON 7: Directa: 5’ CACCTTTCTTCTCCTGCCTG 3’; Inversa: 5’CAGGTGTCCCTAAAACCCAC
3’
EXON 8: Directa: 5’ GTAGCTTGGGCAGGGTCCCC 3’; Inversa: 5’ GGGCACTGGGGTATG-
GAAGG 3’
EXON 9: Directa: 5’ CCTTCCATACCCCAGTGCCC 3’; Inversa: 5’ GCCCACCCCTGACC-
CAAAGC 3’
EXON 10: Directa: 5’ CTCGTTCACCACTTTCTTGC 3’ Inver-
sa::5’GGGGCTCCTGATACAAATGG 3’
EXON 11: Directa: 5’ TGTGAGCCACCACACCTGTC 3’; Inversa: 5’ CGAAGGGGCTAGATGA-
CAGT 3’
La mezcla de reacción contenía por cada tubo de ensayo especial para
PCR de 0,2 ml de capacidad: tampón de reacción PCR, 5 µl; disolución de
NTPs, 1 µl; enzima Taq polimerasa, 1 µl y agua, 41 µl ; los volúmenes de
las disoluciones de los cebadores y las concentraciones de MgCl2 dependie-
ron de las condiciones del programa y de la clase de enzima utilizada. El
programa de amplificación por PCR consistió en las siguientes etapas:
1ª. Temperatura: 94°C. Tiempo: 5 min con la Taq de Biotools y 10 min
con la Gold. Proceso: Inicio de la desnaturalización de la doble hélice de
ADN. 2ª. Temperatura: 94°C. Tiempo: 30 seg. Proceso: Desnaturalización de
la doble hélice de ADN en el proceso ciclico. 3ª. Temperatura: 95ºC. Tiempo
:20 seg. Proceso: Hibridación específica entre las cadenas del cebador y las
de ADN. 4ª. Temperatura: 72°C. Tiempo: 20 seg. Proceso: Elongación de las
cadenas sintetizadas de nuevo. 5ª Temperatura: 72°C. Tiempo: 3 min.
Proceso: Elongación final. 6ª. Temperatura: 4°C. Tiempo: f Proceso :
Mantenimiento. Las etapas 2ª, 3ª y 4ª se repitieron durante 40 ciclos
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