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Para confirmar que la uni%u00f3n del anticuerpo de captura antiMMP9, se produce satisfactoriamente, se realiza una etapa posterior a la inmovilizaci%u00f3n del analito, mediante la adici%u00f3n de un anticuerpo de detecci%u00f3n biotinilado (Ac-MMP9-biotin) que denominamos Ac secundario (Figura 3A). Los resultados obtenidos se muestran en la Figura 3B.3.2 estudio previo de adsorcionesinespec%u00edficasCon el fin de estudiar la posible uni%u00f3ninespec%u00edfica del analito a la superficieelectr%u00f3dica en lugar de al anticuerpo de3. resUltadosEn este apartado se detallan los estudiosrealizados en este trabajo, realiz%u00e1ndose ladiscusi%u00f3n de los mismos en el apartado 4.3.1 Caracterizaci%u00f3n electroqu%u00edmica de lasdiferentes etapas de preparaci%u00f3n delinmunosensorCon la finalidad de estudiar la modificaci%u00f3n dela superficie electr%u00f3dica, tras las sucesivasetapas de preparaci%u00f3n del biosensor, se realiz%u00f3un estudio electroqu%u00edmico mediante EIS y CV.Los datos obtenidos se representan en la Figura 2A y Figura 2B respectivamente.198ANALESRANFwww.analesranf.coman. r. acad. Farm.vol. 91. n%u00ba2 (2025) %u00b7 pp. 193-206 Label-free electrochemical inmunosensor formetaloproteinase 9 determinationIrene Charneco, Marta S%u00e1nchez, et al.Figura 2. (a) diagrama Nyquist y (b) voltamogramas c%u00edclicos de 5 mM de Fe(CN)4%u2212/3%u2212 en 0,1 M dedisoluci%u00f3n tamp%u00f3n fosfato pH 7,4 en las diferentes etapas de formaci%u00f3n del inmunosensor.Figura 3. (a) esquema de la etapa de adici%u00f3n del anti-MMP9-biotina. (b) resultados de la comprobaci%u00f3n de la correctauni%u00f3n de ac captura-MMP9. Condiciones experimentales: edC/NHss, 100 mM, 10%u00b5l, 30 min; ac captura, 10 %u00b5g/ml,5 %u00b5l, 30 min; bsa 1%, 5 %u00b5l, 30 min; MMP9 0 o 10ng/ml, 5 %u00b5l, 60 min; ac detecci%u00f3n, 10 %u00b5g/ml, 5 %u00b5l, 30 min.