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ANALESRANFwww.analesranf.com181 an. R. acad. Farm.vol. 91. n%u00ba 2 (2025) %u00b7 pp. 173-192La vacuna no replicativa de ADN, pPAL-S + pPAL-N,libre de genes de resistencia a antibi%u00f3ticos, confiereprotecci%u00f3n completa en ratones frente al SARS-CoV-2Pedro J. Alcolea, Jaime Larraga et al.Figura 1. la vacuna candidata pPal-Sfs + pPal-N. (a) Mapa pPal-Sfs. Sfs es una versi%u00f3n modificada optimizadapara codones de la secuencia de referencia del SaRS-Cov-2 de wuhan que contiene una modificaci%u00f3n para evitarla escisi%u00f3n del producto proteico por la furina. Preparaci%u00f3n en laboratorio a gran escala del pl%u00e1smido pPal-Sfsque contiene conformadores superenrollados (CCC), formas circulares abiertas (oC), d%u00edmeros CCC y tr%u00edmerosCCC. western blot de extractos de prote%u00ednas enteras de c%u00e9lulas HEK293 transfectadas con pPal, pPal-S y pPalSfs. El anticuerpo primario fue el anticuerpo policlonal anti-S de cabra diluido 1:800 (abcam #ab272504,Cambridge, Reino Unido) que solo reconoce la subunidad S2. El anticuerpo secundario fue Ig policlonal anticonejo conjugado con HRP diluido 1:2.000. la furina escinde la prote%u00edna S obtenida de pPal-S, pero no la Sfs depPal-Sfs. (b) Preparaci%u00f3n de laboratorio a gran escala del pl%u00e1smido pPal-N que contiene conformadores CCC,oC, CCC-d%u00edmero y CCC-tr%u00edmero. western blot de extractos de prote%u00ednas enteras de c%u00e9lulas HEK293 transfectadascon pPal y pPal-N. El anticuerpo primario fue un anticuerpo policlonal anti-N de conejo diluido 1:500. Elanticuerpo secundario fue Ig policlonal anti-conejo conjugado con policlonal anti-conejo conjugado con HRPdiluido 1:2.000. (C) y (d) inmunofluorescencia de c%u00e9lulas HEK293 cultivadas transfectadas con pl%u00e1smidos pPal,pPal-Sfs y pPal-N. las diluciones de anticuerpos anti-S y anti-N fueron 1:50. El control de pPal se incub%u00f3 conambos anticuerpos. El anticuerpo secundario fue alexa Fluor%u00ae 488 Igg anti-conejo conjugado en cabra diluidoa 1:200. Se observa la expresi%u00f3n de Sfs y N.