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y les fijaron un fluorocromo, para luegoexponerlos a linfocitos CD8 y evaluar laafinidad de los p%u00e9ptidos por los CD8, as%u00ed losque resultaron con mayor afinidad ser%u00edan sublanco para esta nueva terapia con neoant%u00edgenos. Para los 16 pacientes se identific%u00f3una mediana de 102 mutaciones som%u00e1ticas nosin%u00f3nimas (NSM por sus siglas en ingl%u00e9s) (33). Para crear la terapia clonaron los TCR quefueran capaces de reconocer a los neoant%u00edgenos, para eso, sacaron PBMC de lospacientes para exponerlos a este p%u00e9ptido quesintetizaron que ten%u00eda fluorescencia y as%u00edpod%u00edan identificar qu%u00e9 c%u00e9lulas T son las quereconocen a los neo-ant%u00edgenos. De esas c%u00e9lulasT, clonaron el TCR%u03b1 y es el que usaron comoTCR end%u00f3geno. Despu%u00e9s, las c%u00e9lulas CD8 seelectroporaron con la nucleasa CRISPR-Cas9para desactivar los TCR end%u00f3genos y unpl%u00e1smido HR que codifica al TCR transg%u00e9nico,luego se cultivaron por 11 d%u00edas y secriopreservaron (33).De los 16 pacientes seleccionados: 11presentaban c%u00e1ncer colorrectal estable demicrosat%u00e9lite; 2 c%u00e1ncer de mama conreceptores hormonales positivos; 1 c%u00e1ncer deovario; 1 melanoma; y 1 c%u00e1ncer de pulm%u00f3n. Alos pacientes se les dividi%u00f3 por dosis: A. Elnivel 3 estaba conformado por nuevepacientes que recibieron tres neoTCR, B. Elnivel 2 formado por tres pacientes con dosneoTCR y C. El nivel 1 ten%u00eda a cuatropacientes con un neoTCR. El primer nivelrecibi%u00f3 una terapia de pre acondicionamientolinfodepletor de 300 mg/m2 de ciclofosfamiday 30 mg/m2 de fludarabina durante 3 d%u00edas, lospacientes pertenecientes a los otros dosniveles recibieron la misma dosis defludarabina, una dosis mayor deciclofosfamida, 600 mg/m2 y %u00e9sta se aplic%u00f3 por4 d%u00edas (33). Se confirm%u00f3 la funcionalidad de la terapialuego de realizar una microscop%u00eda defluorescencia en cuatro muestras de biopsia,que detectaba a los neo-TCR, las muestras seobtuvieron luego de la infusi%u00f3n de las c%u00e9lulas.El resultado evidenci%u00f3 que las c%u00e9lulas estabanel paciente 2 (P2) desarroll%u00f3 una EICH cut%u00e1neade grado 2 tras el TCMH y necesit%u00f3 corticoidesa nivel t%u00f3pico y sist%u00e9mico por 3 semanas. Eneste paciente no se detectaron las c%u00e9lulasinfundidas en la sangre perif%u00e9rica, ni en lam%u00e9dula %u00f3sea tras el trasplante, y la EICH seatribuy%u00f3 al donante del TCM alog%u00e9nico, debidoa que el ni%u00f1o sobrevivi%u00f3 al final deltratamiento (32).Todos los pacientes experimentaron RSC enun plazo de 2 a 7 d%u00edas, los pacientes (P7 y P8)requirieron intervenciones adicionales por serde grado 2. Ambos recibieron fluidos para lahipotensi%u00f3n y fueron tratados con tocilizumab,P7 recibi%u00f3 dos dosis de tocilizumab ydesarroll%u00f3 un s%u00edndrome de neurotoxicidad degrado 4, asociado a la terapia con c%u00e9lulasinmunoefectoras que se manifest%u00f3 comoconvulsiones generalizadas, lo que requiri%u00f3cuidados intensivos y tratamientoantiepil%u00e9ptico. Sin embargo, este pacientesobrevivi%u00f3 al final del estudio. Los resultadosfinales de este estudio se%u00f1alan que, de los 6pacientes, cuatro fallecieron, mientras que elpaciente 2 y el paciente 7 sobrevivieron a esteestudio (32).3.4. Ensayos cl%u00ednicos CAR-T-independientes Los ensayos de esta categor%u00eda se resumen enla Tabla 2.3.4.1. Terapia c%u00e1ncer s%u00f3lido - remoci%u00f3n delTCR con vectores no viralesEn este estudio Foy et al. realizaron un ensayocon una muestra de 16 pacientes condiferentes tumores s%u00f3lidos metast%u00e1sicos, enreca%u00edda o refractarios, a estos pacientes se lesrealiz%u00f3 una biopsia del tumor y se les extrajoPBMCs, para m%u00e1s tarde comparar ambos ADNsmediante secuenciaci%u00f3n de exoma completo(WES por sus siglas en ingl%u00e9s). Se compararonlas dos secuencias para saber cu%u00e1les eran neoant%u00edgenos, es decir, ant%u00edgenos que aparecens%u00f3lo en el tejido tumoral y no en el tejidosano. Posteriormente, sintetizaron losp%u00e9ptidos correspondientes a los neoant%u00edgenos76ANALESRANFwww.analesranf.comIModulation of the immune system to fight cancerusing CRISPR-Cas9, dependent or independent ofCAR-T technologySamuel Torrej%u00f3n y Caroline WeinsteinAn. R. Acad. Farm.Vol. 91. n%u00ba1 (2025) %u00b7 pp. 67-82