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141ANALESRANFwwwanalesranfcomDescifrandoelmecanismodeinhibicióndeunapseudoquinasalaquinasaligadaaintegrinasyelcpd22JavierGarcíaMarínAnRealAcadFarmVol88nº2(2022)·pp---DadoquelosestudioscomputacionalesapuntanclaramenteaqueelcPD22escapazdeunirseaILKy,másenconcretoasucentropseudoactivosehacenecesarioelempleodealgunatécnicaquepuedaconfirmarestahipótesisyquenosebaseenlascontrovertidascapacidadescatalíticasdelaenzimaParaestefinsedecidióutilizarlatécnicaderesonanciadeplasmóndesuperficie(sPrdelingléssurfacePlasmonresonance)lacualpermiterealizarmedidasdeafinidad ycinéticaentreunamacromolécula(ILK)yunanalito(cPD22)sinnecesidaddemarcajesenzimáticosfluorescentesoradioactivos(44)DuranteelexperimentoseinmovilizóenunchipdeorolaILKrecombinantemedianteprocedimientosestándaryseguidamentesehizofluirelcPD22adistintasconcentracionesconel findemedir siexisteuniónalaproteínaysuintensidad(Figura10)DeesteensayosepudoconcluirqueefectivamenteelcPD22tienecapacidaddeunióndirectaaILKtalycomomuestraengeneralloscálculosdeenergíalibreapoyantambiénlahipótesisdequeelcPD22 tieneunabuenaafinidadporelbolsillodeAtPdeILKelcualconstituiríasusitiodeuniónapoyandolosresultadosobtenidosenelanálisisquimioinformáticoydeDm34EnsayosderesonanciadeplasmónsuperficialLasupuestaactividadquinasadeILKesobjetivodecontroversiahastaeldíadehoy(40-42)Apesardequehayautoresquereportansusconstantesenzimáticaslosdetractoresdefiendenqueestaesunaproteínaobtenidadelisadosnopurificadoscorrectamenteconcomponentesdesconocidos(10)cuandoseproducelaproteínarecombinanteenecolioseinmunoprecipitanomuestraningunaactividadenzimática(10)ApesardetodoparececlaroquedealgúnmodolaILKinvivotienecapacidaddefosforilardistintossustratosentrelosquedestacanAktyGsK-3β(94043)Figura9contribuciónenergéticaalaenergíalibredeuniónporresiduoparaloscomplejosdeILK-AtPeILK-cPD22Figura10sensogramadesPrmostrandolaunióndecPD22aILKrecombinante
