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J.	
  L.	
  ARIAS	
  MEDIANO	
  &	
  col	
  

	
  
condiciones	
  experimentales	
  ya	
  descritas.	
  Con	
  este	
  objetivo,	
  se	
  depositó	
  una	
  gota	
  de	
  
suspensión	
  de	
  nanocompuestos	
  en	
  un	
  portaobjetos	
  y,	
  a	
  continuación,	
  se	
  localizó	
  el	
  
imán	
  en	
  diferentes	
  posiciones	
  con	
  respecto	
  a	
  la	
  suspensión.	
  

        La	
   capacidad	
   de	
   generar	
   calor	
   de	
   las	
   nanopartículas	
   Fe3O4/PCL	
   bajo	
   la	
  
acción	
  de	
  un	
  gradiente	
  electromagnético	
  alterno	
  se	
  estudió	
  in	
  vitro	
  y	
  por	
  triplicado	
  
a	
   25,0	
   ±	
   0,5	
   ºC.	
   Para	
   ello,	
   se	
   prepararon	
   5	
   mL	
   de	
   una	
   suspensión	
   acuosa	
   de	
  
nanopartículas	
  (10	
  mg/mL).	
  La	
  frecuencia	
  y	
  la	
  intensidad	
  del	
  gradiente	
  magnético	
  
utilizado	
  fueron	
  250	
  kHz	
  y	
  4	
  kA/m,	
  respectivamente.	
  

2.2.4.	
  Compatibilidad	
  sanguínea	
  

        Quizás	
  una	
  de	
  las	
  principales	
  dificultades	
  a	
  la	
  hora	
  de	
  abordar	
  el	
  diseño	
  
de	
   un	
   coloide	
   para	
   el	
   transporte	
   de	
   fármacos	
   sea	
   su	
   reducida	
   estabilidad	
   en	
  
contacto	
   con	
   la	
   sangre	
   y	
   su	
   rápido	
   aclaramiento	
   plasmático	
   por	
   el	
   sistema	
  
retículo	
   endotelial.	
   Ambas	
   circunstancias	
   determinan	
   que	
   el	
   coloide	
   no	
   logre	
  
mejorar	
   la	
   actividad	
   del	
   fármaco	
   vehiculizado	
   (3,	
   6).	
   Por	
   este	
   motivo,	
  
decidimos	
   investigar	
   la	
   interacción	
   que	
   se	
   produce	
   entre	
   las	
   nanopartículas	
  
Fe3O4/PCL	
   y	
   los	
   componentes	
   sanguíneos.	
   Para	
   ello,	
   se	
   tomaron	
   muestras	
   de	
  
sangre	
   de	
   cinco	
   mujeres	
   adultas	
   sanas	
   (edad:	
   28–40	
   años),	
   las	
   cuáles	
   fueron	
  
procesadas	
  según	
  una	
  técnica	
  ampliamente	
  descrita	
  que	
  permite	
  elucidar	
  el	
  efecto	
  
que	
   un	
   coloide	
   ejerce	
   sobre	
   los	
   eritrocitos,	
   la	
   coagulación	
   y	
   el	
   sistema	
   del	
  
complemento	
  (19,	
  20).	
  En	
  estos	
  experimentos	
  (realizados	
  por	
  triplicado)	
  se	
  utilizó	
  
un	
  tampón	
  fosfato	
  salino	
  (PBS)	
  como	
  solución	
  control.	
  

2.2.5.	
  Análisis	
  de	
  la	
  capacidad	
  de	
  vehiculización	
  de	
  doxorrubicina	
  

        El	
   diseño	
   de	
   nanocompuestos	
   Fe3O4/PCL	
   con	
   el	
   agente	
   quimioterápico	
  
doxorrubicina	
  incorporado	
  se	
  basó	
  en	
  dos	
  metodologías	
  clásicas	
  de	
  vehiculización	
  
de	
  fármacos.	
  En	
  concreto:	
  i)	
  la	
  adsorción	
  superficial	
  tras	
  la	
  formación	
  e	
  incubación	
  
de	
  las	
  nanopartículas	
  en	
  una	
  disolución	
  de	
  principio	
  activo	
  (método	
  de	
  adsorción);	
  
y,	
   ii)	
   la	
   incorporación	
   del	
   fármaco	
   en	
   el	
   medio	
   donde	
   se	
   generan	
   las	
  
nanopartículas,	
  de	
  forma	
  que	
  quede	
  atrapado	
  principalmente	
  en	
  la	
  matriz	
  de	
  éstas	
  
(método	
  de	
  absorción).	
  La	
  cuantificación	
  de	
  la	
  vehiculización	
  de	
  doxorrubicina	
  en	
  
los	
   nanocompuestos	
   se	
   realizó	
   mediante	
   espectrofotometría	
   ultravioleta-­-visible.	
  
Los	
   experimentos	
   se	
   realizaron	
   por	
   triplicado	
   para	
   cada	
   una	
   de	
   las	
  
concentraciones	
   molares	
   de	
   fármaco	
   ensayadas	
   (10-­-5,	
   10-­-4	
   y	
   10-­-3).	
   Estas	
  
metodologías	
   se	
   encuentran	
   detalladas	
   en	
   diversos	
   trabajos	
   de	
   investigación	
  
(véase,	
   p.ej.,	
   la	
   referencia	
   13).	
   La	
   cantidad	
   de	
   fármaco	
   incorporado	
   en	
   los	
  
nanocompuestos	
  se	
  expresó	
  en	
  términos	
  de	
  eficacia	
  de	
  atrapamiento	
  (entrapment	
  
efficiency,	
   EE)	
   (%)	
   [(fármaco	
   vehiculizado	
   (mg)	
   /	
   cantidad	
   total	
   de	
   fármaco	
  
utilizada	
   (mg))	
   x	
   100]	
   y	
   de	
   carga	
   de	
   fármaco	
   (drug	
   loading,	
   DL)	
   (%)	
   [(fármaco	
  
vehiculizado	
  (mg)	
  /	
  masa	
  total	
  utilizada	
  de	
  nanopartículas	
  	
  (mg))	
  x	
  100].	
  

350	
  

	
  
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