Page 115 - 74_02

VOL. 74 (2), 283-306, 2008 DESARROLLO, ANÁLISIS Y OPTIMIZACIÓN DE MODELOS...

CYP3A4) en los cultivos de hepatocitos preparados a partir de biop-
sias hepáticas con esteatosis fueron inferiores, particularmente la
actividad CYP3A4 de forma significativa (Tabla 2).

Por otra parte, se estudió la influencia de la esteatosis en la capa-
cidad metabólica en microsomas preparados a partir de hígados hu-
manos esteatósicos y no esteatósicos (Tabla 4). Para este fin se cuan-
tificó la actividad ECOD y el resto de actividades se evaluaron como
prueba selectiva para diferentes isoformas del CYP. Las preparacio-
nes obtenidas a partir de hígados grasos muestran un descenso signi-
ficativo del 85%, aproximadamente, para los valores de ECOD y del
56 y 30% para las actividades CYP1A2 y CYP3A4 respectivamente.

Ensayo rápido para realizar el control de calidad funcional
de los hepatocitos aislados a partir de órganos descartados
para implante

Para poder efectuar un control de calidad funcional de los hepa-
tocitos recién aislados en un periodo de tiempo muy corto como
criterio de aceptación o exclusión para ser utilizados para trasplan-
te celular y/o criopreservación, se procedió a la incubación de una
alícuota de la suspensión de hepatocitos recién obtenida con una
mezcla de sustratos, permitiéndonos determinar simultáneamente
la actividad de cinco de los isoenzimas más importantes del P450
(CYP1A2, CYP2A6, CYP3A4, CYP2C9 y CYP2E1). Todas las muestras
analizadas mostraron actividad para las diferentes isoformas estu-
diadas a niveles comparables a los hepatocitos obtenidos de biopsias
quirúrgicas de hígados normales que constituyen el control de refe-
rencia (Tabla 5).

Caracterización funcional de las células de hepatoma humano
HepG2

Se determinaron las actividades enzimáticas de diferentes isofor-
mas del P450 en las células HepG2 y los resultados se compararon
con las actividades de los cultivos primarios de hepatocitos huma-
nos. Los niveles de actividad de los diferentes isoenzimas del P450

293