Page 119 - 74_02

VOL. 74 (2), 283-306, 2008 DESARROLLO, ANÁLISIS Y OPTIMIZACIÓN DE MODELOS...

Mecanismos moleculares responsables de la pérdida
de expresión de los enzimas del P450 en células HepG2

Con objeto de investigar los posibles mecanismos moleculares
responsables de la reducción en los enzimas de biotransformación
en células HepG2, se evaluó la expresión de factores de transcripción
que controlan la expresión de genes hepáticos tales como HNF4a,
PGC1a, HNF3, SRC, C/EBPß (10). El análisis de los niveles de mRNA
mostró niveles inferiores a los obtenidos en cultivo primario de
hepatocitos de la mayoría de los factores de transcripción analizados
(COUP-TF gamma, SRC1, SRC2, C/EBPß, HNF3?), con excepción de
los factores SMRT y HNF4a (clave en el control de la expresión de
genes hepáticos) (11), que muestran niveles de expresión iguales
o superiores en el hepatoma humano HepG2 (Figura 2). El factor
HNF4a, aunque se expresa en las células HepG2, no es funcional-
mente activo. Con el fin de determinar la causa de la falta de acti-
vidad de HNF4a se realizó un análisis de los niveles de mRNA de sus
coactivadores PGC1a y SRC1. Los niveles de mRNA de PGC1a y
SRC1 son muy inferiores a los expresados en hígado humano y en
cultivo de hepatocitos (Figura 3). Paralelamente se evaluó la expre-
sión de diferentes isoformas del P450, observándose tan sólo niveles
marginales de sus correspondientes mRNA en comparación con el
hígado (Figura 3). Estos resultados sugieren que la falta de función
de HNF4a en células HepG2 podría explicarse por la baja expresión

TABLA 6. Actividad del citocromo P450 en cultivos de hepatocitos a las 24 horas
y en hepatoma humano HepG2

CYP ACTIVIDAD HEPATOCITOS HepG2

n=6 n=5

1A1/2 EROD 4,5 ± 2,0 0,9 ± 0,5**
1A2 MROD 5,04 ± 1,87 0,35 ± 0,34**
2A6 0,05 ± 0,04**
2B6 CH 121 ± 70 0,28 ± 0,26*
2E1 BROD 2,46 ± 1,95
3A4 PNP <1
TEST 104 ± 57 0,18 ± 0,16**
253 ± 110

Las actividades se dan en pmoles producidos por miligramo de proteína y por minuto. Los
datos son la media ± SD. *P < 0,05 y **P < 0,01 con respecto a hepatocitos.

297