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JUAN SANDOVAL Y COLS. AN. R. ACAD. NAC. FARM.

un único producto de PCR. Como control de carga se analiza el gen
rRNA 18S.

RESULTADOS

1. Rastreo de genes diana

El estudio de los mecanismos de regulación génica durante la PA
se ha iniciado con un rastreo y la selección de los genes potencialmen-
te implicados en este proceso patológico. Estudios previos con mi-
croarrays procedentes de dos grupos independientes (7-8), y un estu-
dio detallado en nuestro laboratorio de la cinética de expresión de
gran cantidad genes (datos no mostrados), evidenciaron la existencia
de diferentes patrones de expresión temporales para los genes estudia-
dos. En base a su implicación en la PA demostrada por estudios con
ratones knock out (8-9), a su perfil temporal y grado de expresión
hemos seleccionado, para estudiar los mecanismos epigenéticos de
regulación, los genes egr-1 (early growth response gene) (8) como ejem-
plo de genes inmediato-tempranos, icam-1 (intercelular adhesion mo-
lecule 1) (10) como ejemplo de genes tempranos, y tnf-a (tumor necro-
sis factor a) (9) como ejemplo de genes tardíos.

2. Estudio de las modificaciones de histonas

Entre los mecanismos epigenéticos de regulación de la actividad
de la cromatina destaca el de las modificaciones postraduccionales
de las histonas. Así pues, se caracterizó el patrón de modificacio-
nes de las histonas en los promotores de los genes seleccionados
y se correlacionó con la activación transcripcional durante la PA.
Se seleccionaron para este estudio anticuerpos asociados a acti-
vación transcripcional, y en algún caso a represión en mamífe-
ros. Fundamentalmente se ha analizado las acetilaciones de las his-
tonas (anticuerpos a-H3K9ac, a-H3K14ac, a-H3K18ac, a-H3K23ac,
a-H3K27ac, a-H4K5ac, a-H4K8ac y a-H4K16ac), algunas metilacio-
nes (a-H3K4me2, a-H3K4me3, a-H3K9me2 y a-H3R17me2) y la fosfori-
lación de la ser10 de H3 (a-H3S10ph-K14ac) implicadas todas ellas en
la regulación transcripcional.

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