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VOL. 72 (1), 5-25, 2006 HIPÓTESIS GLUTAMATÉRGICA DE LA ESQUIZOFRENIA...

Experimentación con animales

En este estudio se ha trabajado con animales de acuerdo con los
criterios resaltados en «Guía para el Cuidado y Empleo de Animales
de Laboratorio» preparada por la Nacional Academy of Sciences y
publicada por Nacional Institutes of Health (NIH 1985: 86-23).

RESULTADOS

GLYT1 interacciona in vitro con una variedad
de dominios PDZ

Dado que el extremo carboxilo terminal de GLYT1 posee un
motivo de interacción con dominios PDZ, se decidió buscar nuevas
proteínas que pudieran interaccionar con el transportador. Para ello
ensayamos la capacidad de interacción del extremo carboxilo termi-
nal de GLYT1 con una matriz de dominios PDZ de diversas pro-
teínas. Previamente se había preparado una construcción con los
77 aminoácidos del extremo Ct de GLYT1 clonados en fase con un
péptido de seis histidinas. A esta construcción se le denominó His-
GLYT1Ct. La proteína se expresó en bacterias E. Coli (BL21). El
extracto derivado de estas bacterias se incubó con la membrana en
la que el fabricante había colocado por duplicado una serie de do-
minios PDZ (Figura 2A). Los puntos a los que se unió His-GLYT1Ct
fueron visualizados gracias a un anticuerpo dirigido contra la cola
de histidinas, seguido de detección por quimioluminiscencia (Figu-
ra 2B). La intensidad de las señales se cuantificó mediante un aná-
lisis digital de las películas fotográficas (Figura 2C).

La interacción más fuerte se produjo con el tercer dominio PDZ
de la proteína SAP-97. Sin embargo, no hubo reacción con el primer
dominio PDZ de dicha proteína. Otras proteínas con las que se ob-
servó interacción fueron la Chapsina 110, a través de su segundo
dominio, y MPP2 mediante su único dominio PDZ. La interacción
también fue intensa con los dominios PDZ de RIL (reversion indu-
ced LIM protein) y moderada con OMP25 (Mitocondrial outern
membrane protein 25). Únicamente el tercer dominio de PSD-95
estaba representado en la matriz comercial y presentó una interac-

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