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R. HERNÁNDEZ, T. TERUEL Y M. LORENZO CERAMIDA Y RESISTENCIA A LA INSULINA
Figura 5.- C2-ceramida inhibe la translocación de GLUT4 en respuesta a la insulina.
Las células privadas de suero durante 20 horas se pretrataron en presencia o ausencia
de C2-ceramida 100 PM (C2) o C2-dihidroceramida 100 PM (DHC) durante 6 horas
seguido de estimulación con insulina 10 nM (Ins) durante 30 minutos. Los extractos
celulares fueron recogidos y sometidos a fraccionamiento subcelular. 10 Pg de pro-
teína de las fracciones de membrana interna (MI) y membrana plasmática (MP) de
cada condición se resolvieron en un gel de poliacrilamida-SDS seguido de Western
Blot e inmunodetección utilizando los anticuerpos específicos anti-GLUT4, anti-
GLUT1 y anti-caveolina-1. En la figura aparece el correspondiente análisis densito-
métrico del contenido de GLUT4 en ambas fracciones expresado como unidades
arbitrarias (medias r SEM de 4 experimentos distintos). El estudio para calcular el
grado de significación estadística se ha realizado como en la Fig. 2. Las diferencias
entre los valores en presencia de insulina vs. controles se representan por (*) y las
diferencias entre los valores en presencia de insulina más C2-ceramida vs. insulina se
representan por ('); *, ' p<0.01.
Como la ceramida afectaba al transporte de glucosa y a la translo-
cación de GLUT4 estimulados por insulina, quisimos estudiar a conti-
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