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VOL. 68 (3), ANAL. REAL ACAD. NAC. FARM

En líneas celulares adipogénicas como 3T3-L1, el TNF-alfa in-
hibe el proceso de diferenciación adipogénica, previniendo la expresión
de genes específicos de adipocitos, entre ellos el gen de GLUT4. Quisi-
mos estudiar el efecto del TNF-alfa y su mediador, la ceramida, en la
señalización de la insulina que conduce a la expresión génica de GLUT4
en los adipocitos marrones fetales. Realizando ensayos de Northern blot
comprobamos que el tratamiento con TNF-alfa o C2-ceramida por sí so-
los no modificaba la expresión basal de mRNA de GLUT4 pero dismi-
nuía completamente la acumulación de GLUT4 inducida por insulina.
Estos resultados indicaban que tanto TNF-alfa como C2-ceramida esta-
ban interfiriendo en la regulación transcripcional de este gen por insulina.
En consecuencia decidimos estudiar el efecto de ambos compuestos en la
transactivación del promotor de GLUT4 mediante el empleo de la cons-
trucción GLUT4-CAT. El tratamiento con insulina de células transfecta-
das produjo un incremento de seis veces en la actividad CAT. Sin embar-
go, la transactivación del promotor de GLUT4 estimulada por insulina no
se produjo en presencia de TNF-alfa o C2-ceramida. Los factores de
transcripción específicos involucrados en la transactivación por insulina
del promotor de GLUT4 no han sido todavía identificados, pero se ha
descrito la existencia de elementos de respuesta a los factores de trans-
cripción de la familia de los C/EBPs en el promotor del gen de GLUT4.
Además se ha comprobado que el TNF-D reduce los niveles de C/EBPD
en líneas celulares adipocíticas 3T3-L1 [32], por lo que decidimos estu-
diar el efecto del TNF-alfa/ceramida en la acumulación del mRNA de
C/EBPD por Northern blot. El tratamiento con insulina durante 24 horas
produjo una inducción en los niveles de expresión de C/EBPD, siendo
este efecto totalmente inhibido por el tratamiento con TNF-alfa o C2-
ceramida. Estos resultados coinciden con la disminución del mRNA de
GLUT4 tras la estimulación con los mismos factores y sugieren la posi-
ble existencia de un mecanismo indirecto por el cual la ceramida interfie-
re en la ruta de señalización de la insulina inactivando Akt/PKB y posi-
blemente su translocación al núcleo tal y como proponen Salinas y col.
[33] causando una disminución en la expresión del factor de transcrip-
ción C/EBPD necesario para la expresión génica de GLUT4.

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