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VOL. 66, (3) 2000 APOPTOSIS EN ADIPOCITOS MARRONES

específico wortmanina, que se une a la subunidad catalítica p110 de la PI
3-quinasa, inhibiéndola, así como un inhibidor estructuralmente no
relacionado, como es el LY294002 (26,27). Ambos inhibidores
bloquearon la estimulación de la actividad PI 3-quinasa por la insulina en
los adipocitos marrones inmortalizados, a las mismas dosis que se habían
observado anteriormente en los adipocitos marrones primarios (32).

El siguiente paso fue comprobar si la wortmanina inhibía la acción
de la insulina y del IGF-I en la prevención de la fragmentación del ADN.
Se pudo observar que la wortmanina bloqueaba el efecto anti-apoptótico
de la insulina de una forma dependiente del tiempo, alcanzando su efecto
máximo a la misma concentración que producía la total inhibición de la
actividad PI 3-quinasa. A esa misma dosis, la wortmanina también inhibió
la acción anti-apoptótica del IGF-I. Además, el otro inhibidor, LY294002
10 PM, fue capaz de anular también el rescate de apoptosis de la insulina.

Por otra parte, basándonos en el hecho de que la insulina/IGF-I
necesitan la activación de la ruta Ras/Raf/MEK/MAP-quinasa para
inducir la proliferación de los adipocitos marrones, y que los factores
mencionados rescatan de apoptosis aumentando el número de células en
ciclo, estudiamos el papel de la activación de MAP-quinasa en este efecto
anti-apoptótico. El bloqueo de la fosforilación de p42/p44 MAP-quinasa,
mediante la inhibición de MEK con el inhibidor PD098059, bloqueó el
efecto protector de la insulina, aumentando la fragmentación del ADN y
el porcentaje de células hipodiploides, y disminuyendo las células en
ciclo.

Ya habíamos visto que, en concreto en nuestro sistema, la proteína
BclxS, estaba estrechamente relacionada a la inducción de apoptosis en
ausencia de suero. Considerando este hecho, estudiamos la expresión de
Bcl-xL y Bcl-xS por Western blot en lisados de adipocitos marrones
inmortalizados tratados en las mismas condiciones anteriores. Nuestros
resultados mostraron que la inhibición de la muerte celular por insulina en
los adipocitos marrones inmortalizados, estaba asociada a una
disminución en la expresión de Bcl-xS, disminución que resultaba anulada
por el bloqueo de la PI 3-quinasa y de la MAP-quinasa.

Continuando con la cascada de señalización que conducía a la
supervivencia de los adipocitos marrones cultivados en ausencia de suero,

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