Page 28 - 66_03

PALOMA NAVARRO Y COLS. ANAL. REAL ACAD. FARM.

(ausencia de suero), los niveles de la proteína Bcl-xS aumentaban
considerablemente, a la vez que disminuía el contenido en Bcl-2.
Además, mediante experimentos de co-inmunoprecipitación demostramos
que el Bcl-2 presente en la célula tras la retirada de suero, estaba asociado
a Ras y Raf, y que esta asociación se producía a través de una forma de
Bcl-2 fosforilada en serina/treonina. Por otra parte, mediante
experimentos de inmunoprecipitación, demostramos la triple asociación
entre Ras, Raf y Bcl-2, y que además, en ausencia de suero, el Bcl-2
asociado a Ras estaba fosforilado en serina/treonina y posiblemente
inactivo.

3.- LA INSULINA Y EL IGF-I RESCATAN DE APOPTOSIS A LOS
ADIPOCITOS MARRONES IMNORTLIZADOS: SEÑALIZACIÓN
IMPLICADA

Para estudiar el posible papel de la insulina/IGF-I como factores
de supervivencia en los adipocitos marrones inmortalizados (células MB
4.9.2), procedimos a cultivar las células durante 6h en medio libre de
suero en presencia de distintas concentraciones de insulina e IGF-I, para
analizar posteriormente la existencia de ADN extranuclear fragmentado.
El tratamiento de los adipocitos marrones inmortalizados con insulina e
IGF-I, fue capaz de revertir la apoptosis inducida por la ausencia de suero,
lo que se comprobó tanto por la disminución del número de células
hipodiploides, como por la desaparición de la fragmentación del ADN.
Además los dos factores permitieron a las células entrar en el ciclo
celular, que había quedado parado en G0/G1 tras la retirada de suero.

En cuanto a la señalización implicada en los efectos anti-
apoptóticos de los factores de supervivencia, hay muchos trabajos que
indican que el inhibidor de la PI 3-quinasa, wortmanina, bloquea la
protección de NGF, PDGF o IGF-I/insulina en células PC-12 privadas de
suero. En nuestro laboratorio hemos demostrado recientemente la
estimulación de la actividad enzimática de la PI 3-quinasa en adipocitos
primarios e inmortalizados tratados con IGF-I e insulina (13,25). Para
determinar si el efecto de la insulina y del IGF-I en la inhibición de
apoptosis implicaba a la vía de la PI 3-quinasa, utilizamos el inhibidor

10