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PALOMA NAVARRO Y COLS. ANAL. REAL ACAD. FARM.

alteración del potencial de membrana mitocondrial ('<m). En este
sentido, nosotros decidimos examinar el '<m en nuestras células, en
condiciones de crecimiento (presencia de suero) y de apoptosis (ausencia
de suero), así como bajo el tratamiento con Z-VAD. El potencial de
membrana se midió por la fluorescencia de la Rodamina 123 (rh123). La
ausencia de suero dio lugar a una disminución del potencial de un 20% a
las 12h y de un 40% a las 24h, indicando que el proceso apoptótico estaba
acompañado de una despolarización mitocondrial. Sin embargo el
tratamiento con Z-VAD previno totalmente esta pérdida de '<m.

2.- LA SOBREEXPRESIÓN DE H-RAS INDUCE APOPTOSIS EN LOS
ADIPOCITOS MARRONES EN AUSENCIA DE SUERO: ASOCIACIÓN
DE BCL-2 CON RAS Y RAF-1

Otra línea celular adipocítica con la que trabajamos en nuestro
laboratorio es la denominada MB 1.3.19. Se trata de adipocitos marrones
inmortalizados y transformados por transfección con una construcción
permanentemente activa de H-Ras (11). Al realizar nuestros primeros
experimentos con estas células, pudimos observar, que al igual que en las
células MB 4.9.2, la ausencia de suero daba lugar al despegue de las
células de la placa de cultivo. Comparando ambas líneas celulares, vimos
que los efectos de la ausencia de suero eran más rápidos en las células
transformadas que en las inmortalizadas.

Para comprobar si el mayor índice de apoptosis encontrado en las
células transformadas (MB 1.3.19) era debido a la sobreexpresión del gen
H-ras transformado, procedimos a transfectar transitoriamente por el
método del PO4Ca, las células inmortalizadas (MB 4.9.2) con un
plásmido que contenía un mutante activo del gen H-ras (pMEXneo H-
raslys12) o con el vector vacío (pMEXneo). Los experimentos de
transfecciones transitorias en las células MB 4.9.2, con una construcción
activa de H-ras, y el posterior análisis del ciclo celular y de la
fragmentación del ADN, demostraron que la sobreexpresión de Ras
transformado daba lugar a una apoptosis masiva en los adipocitos
marrones en ausencia de suero.

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